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乙型肝炎病毒復(fù)制患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中HBV DNA和cccDNA的定量檢測(cè)

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摘要

目的：HBV共價(jià)閉合環(huán)狀DNA(cccDNA)是HBV基因組復(fù)制中間體mRNA和前基因組RNA的合成模板,可作為外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)是臺(tái)存在HBV復(fù)制的重要指標(biāo)。通過(guò)對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制患者PBMCs中HBV DNA和cccDNA的定量檢測(cè),證實(shí)HBV能感染PBMCs,探討血清中HBV DNA和PBMCs中HBV DNA、cccDNA之間的關(guān)系,并觀察HBVDNA和cccDNA在慢性乙型肝炎患者PBMCs中的分布情況。rn 方法：收集2005年10月至2006年3月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院感染病科門(mén)診和住院的慢性乙型肝炎患者外周血標(biāo)本58例。所有病例血清HBVDNA均陽(yáng)性,診斷符合2000年9月第十次全國(guó)病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。以Ficoll密度梯度離心法獲取PBMCs,采用熒光PCR法定量檢測(cè)PBMCs標(biāo)本中總HBV DNA和cccDNA。數(shù)據(jù)利用 SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,PBMCs中總HBV DNA與cccDNA比值分析經(jīng)對(duì)數(shù)化后采用直線回歸分析。rn 結(jié)果：58份PBMCs標(biāo)本中,65.5％(38158)PBMCs HBV DNA陽(yáng)性,53.5％(31/58)PBMCs cccDNA陽(yáng)性。但末次PBMCs洗滌液均未擴(kuò)增出HBV DNA和cccDNA。PBMCs中HBV DNA和cccDNA之間(r=0.894,P＜0.001)、血清中HBV DNA和PBMCs中HBV DNA之間(r=0.666,P＜0.001)、血清中HBV DNA和PBMCs中cccDNA之間(r=0.520,P＜0.001)均存在正相關(guān)關(guān)系,同一患者PBMCs中總HBV DNA含量是cccDNA含量的16-4倍至2310.3倍。rn 結(jié)論：HBV復(fù)制患者PBMCs中cccDNA檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性,進(jìn)一步證實(shí)HBV能感染PBMCs,并在其中復(fù)制;cccDNA水平與PBMCs內(nèi)總HBV DNA水平正相關(guān),提示細(xì)胞內(nèi)HBV復(fù)制中間體cccDNA含量的增加,必將產(chǎn)生大量的病毒,加重血清HBVDNA載量;PBMCs中未發(fā)現(xiàn)總HBVDNA/cccDNA的比值=1的情況,即未找到cccDNA相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)的證據(jù),這也許與PBMCs作為免疫細(xì)胞的集合體,參與了機(jī)體對(duì)HBV免疫作用過(guò)程的各個(gè)環(huán)節(jié)和免疫細(xì)胞更新較快有關(guān)。

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