鼻息肉是耳鼻咽喉科常見病，是一種鼻腔、鼻竇持續(xù)性慢性炎癥性疾病，以鼻腔中形成透明葡萄樣物為特點(diǎn)，術(shù)后具有較高的復(fù)發(fā)性，目前其發(fā)病機(jī)制尚無(wú)明...">

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TH9、TH17及TREG細(xì)胞在鼻息肉發(fā)病中的研究與探討

 
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摘要

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第一章 前言

1．1 鼻息肉

1．2 Th9細(xì)胞

1．3 Th17細(xì)胞

1．4 Treg細(xì)胞

1．5 Th9與Th17細(xì)胞的關(guān)系

1．6 Th17和Treg細(xì)胞的關(guān)系

1．7 本論文研究的設(shè)想、方法與技術(shù)、實(shí)驗(yàn)方案和設(shè)計(jì)、結(jié)果和意義研究設(shè)想

第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法

2．1 標(biāo)本的采集

2．1．1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象

2．1．2 納入標(biāo)準(zhǔn)

2．2 實(shí)驗(yàn)材料

2．2．1 實(shí)驗(yàn)主要試劑及配制

2．2．2 實(shí)驗(yàn)主要設(shè)備及耗材

2．3 實(shí)驗(yàn)方法

2．3．1 臨床標(biāo)本的收集

2．3．2 單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)的提取

2．3．3 流式細(xì)胞術(shù)

2．3．4 實(shí)時(shí)定量PCR(RT-PCR)

2．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3．1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)三種細(xì)胞后的結(jié)果

3．1．1 Th9細(xì)胞的百分比

3．1．2 Th17細(xì)胞的百分比

3．1．3 Treg細(xì)胞的酉分比

3．1．4 Th9細(xì)胞與Th17細(xì)胞的相關(guān)性分析

3．1．5 Th17細(xì)胞與Treg細(xì)胞的相關(guān)性分析

3．2 實(shí)時(shí)定量PCR

3．2．1 外周血中IL-9mRNA的表達(dá)量

3．2．2 外周血中PU．1 mRNA的表達(dá)量

3．2．3 外周血中IRF-4 mRNA的表達(dá)量

3．2．4 外周血中RORc mRNA的表達(dá)量

3．2．5 外周血中Foxp3的表達(dá)量

第四章 討論

第五章 結(jié)論

參考文獻(xiàn)

碩士攻讀期間發(fā)表的文章

致謝

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摘要

目的:
　　鼻息肉是耳鼻咽喉科常見病，是一種鼻腔、鼻竇持續(xù)性慢性炎癥性疾病，以鼻腔中形成透明葡萄樣物為特點(diǎn)，術(shù)后具有較高的復(fù)發(fā)性，目前其發(fā)病機(jī)制尚無(wú)明確定論，近些年Th9、TH17及Treg細(xì)胞是各種疾病的研究熱點(diǎn)，這為鼻息肉的發(fā)病機(jī)制提供了新的研究方向，本研究通過(guò)檢測(cè)鼻息肉患者外周血Th9、Th17及Treg細(xì)胞的表達(dá)，初步探討Th9、Th17及Treg細(xì)胞對(duì)鼻息肉的形成的影響及這三種細(xì)胞在鼻息肉發(fā)病機(jī)制中是否存在相關(guān)性。
　　方法:
　　所有實(shí)驗(yàn)對(duì)象均來(lái)自江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院耳鼻咽喉。頭頸外科住院患者，除慢性鼻竇炎伴鼻息肉患者46例（鼻息肉組）外，另收22例單純鼻出血或鼻中隔偏曲患者外周靜脈血作為對(duì)照組。收集所有參與本研究的患者外周靜脈血，提取單個(gè)核細(xì)胞，分兩部分處理:一部分進(jìn)行細(xì)胞染色后，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩組患者外周靜脈血中Th9、Th17及Treg細(xì)胞的表達(dá)率。另一部分加Trizol充分溶解后，保存于-80攝氏度，整批提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄，最后以用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)兩組患者外周血中Th9，Th17及Treg細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子IL-9mRNA，PU.1，IRF-4，RoRc及Foxp3的相對(duì)表達(dá)量。采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對(duì)外周靜脈血中Th9、Th17和Treg細(xì)胞及三種細(xì)胞的相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子在鼻息肉組和對(duì)照組的差異性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，并對(duì)Th9與Th17細(xì)胞及Th17與Treg細(xì)胞在鼻息肉組中的相關(guān)性進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　(1)鼻息肉患者外周靜脈血中Th9、Th17細(xì)胞的表達(dá)率(1.29％±0.18％，4.03±0.69％)明顯高于對(duì)照組外周靜脈血中Th9、Th17細(xì)胞的表達(dá)率(0.45％±0.14％，1.35％±0.26％，P＜0.05)，而鼻息肉患者外周靜脈血中的Treg細(xì)胞的表達(dá)率(2.98％±0.13％)明顯低于對(duì)照組外周血中Treg細(xì)胞的表達(dá)率(5.44％±0.57％，P＜0.05)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(2)鼻息肉患者組的轉(zhuǎn)錄因子IL-9mRNA，PU.1，IRF-4，RoRc的相對(duì)表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，而Foxp3的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(3)鼻息肉患者外周血靜脈中Th9與Th17細(xì)胞之間無(wú)明顯相關(guān)性(P＞0.05)，Th17與Treg細(xì)胞之間呈負(fù)相關(guān)(r=-0.549，P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　外周靜脈血中高水平的Th9和Th17細(xì)胞對(duì)鼻息肉的形成有一定促進(jìn)作用，而Treg細(xì)胞的較低表達(dá)可能進(jìn)一步加劇了鼻息肉的發(fā)生，且在鼻息肉的發(fā)病機(jī)制中存在Th17/Treg失衡，Th17/Treg細(xì)胞平衡在鼻息肉的發(fā)病機(jī)制中起著重要免疫調(diào)節(jié)作用。

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