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【6h】

黏細(xì)菌及其抗菌活性物質(zhì)的篩選與鑒定

 
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  • 相關(guān)主題

目錄

聲明

摘要

前言

1材料與儀器

1.1材料與試劑

1.2儀器

2黏細(xì)菌的篩選與鑒定

2.1培養(yǎng)基

2.2黏細(xì)菌的篩選方法

2.3黏細(xì)菌的鑒定方法

2.4結(jié)果

2.5黏細(xì)菌的保存

2.6討論

3 1號(hào)黏細(xì)菌的生長(zhǎng)特征

3.1培養(yǎng)基

3.2方法

3.3結(jié)果

3.4討論

4 1號(hào)黏細(xì)菌生物活性物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)

4.1培養(yǎng)基

4.2方法

4.3結(jié)果

4.4討論

5 1號(hào)黏細(xì)菌胞外抗菌活性物質(zhì)的分離純化

5.1培養(yǎng)基

5.2方法

5.3結(jié)果

5.4討論

6 1號(hào)菌抗菌活性物性質(zhì)的鑒定

6.1方法

6.2結(jié)果

6.3討論

小結(jié)

參考文獻(xiàn)

文獻(xiàn)綜述：黏細(xì)菌及其生物活性物質(zhì)分離純化的研究進(jìn)展

在讀期間發(fā)表或待發(fā)表的文章

致謝

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摘要

黏細(xì)菌屬于原核生物，是一類(lèi)可滑動(dòng)的、專(zhuān)性好氧的具有復(fù)雜多細(xì)胞行為的單細(xì)胞革蘭氏陰性桿菌，不僅在細(xì)胞分化、發(fā)育和生物進(jìn)化研究中占有重要地位，而且近年來(lái)作為一種可產(chǎn)生豐富而有用的次級(jí)代謝物的微生物類(lèi)群逐漸受到世界青睞，其中有些可抗細(xì)菌、有些可抗真菌、有些抗癌、有些溶栓，這對(duì)于藥物的研發(fā)具有重要意義。但分離純化黏細(xì)菌相當(dāng)困難和耗時(shí)，并且難于培養(yǎng)，同時(shí)方法特殊。這極大地限制了對(duì)這類(lèi)微生物物種資源的開(kāi)發(fā)，以致其應(yīng)用研究較其它的微生物類(lèi)群更為落后。所以，探索更好的分離純化黏細(xì)菌的方法非常重要。 本研究以純食草兔糞為原料篩選黏細(xì)菌。采用多菌靈、灰黃霉素、克霉唑抑制霉菌、絲狀真菌等真菌的生長(zhǎng)，用加熱法除去不耐熱的雜菌，用低溫冷凍的方法除去可能存在的蠕蟲(chóng)以及不耐反復(fù)凍融的細(xì)菌，兼用選擇培養(yǎng)基VY/4培養(yǎng)基、纖維素培養(yǎng)基、WCX培養(yǎng)基富集黏細(xì)菌。研究中得到了3株細(xì)菌，通過(guò)觀察它們?cè)赩Y/4培養(yǎng)基、纖維素培養(yǎng)基、WCX培養(yǎng)基、LB培養(yǎng)基中的菌落形態(tài)、生長(zhǎng)狀況及在電子顯微鏡下菌株的子實(shí)體、營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和黏孢子的形態(tài)、結(jié)構(gòu)等特征，初步鑒定這3株細(xì)菌均為嗜細(xì)菌群黏細(xì)菌中的囊球黏細(xì)菌屬，發(fā)現(xiàn)這三株菌還未曾被報(bào)道過(guò)，被初步認(rèn)為是新菌株。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)多菌靈、灰黃霉素、克霉唑等均可抑制霉菌、絲狀真菌等的生長(zhǎng)，但多菌靈的抑菌效果較好。多菌靈為農(nóng)業(yè)用藥比先前報(bào)道的放線菌酮價(jià)廉、易得并且毒性較小。 實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)研究了1號(hào)菌，發(fā)現(xiàn)其對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期為3.5～11h，最適起始pH為7.22，最適生長(zhǎng)溫度為34℃；同時(shí)發(fā)現(xiàn)1號(hào)菌胞外及胞內(nèi)物中都有抗菌活性物質(zhì)，且抗菌譜不同，胞外物對(duì)革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有較明顯的抑菌作用，胞內(nèi)物對(duì)部分革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌及革蘭氏陰性細(xì)菌如E.coli有抑菌作用，但對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌的抑菌作用較強(qiáng)，兩者對(duì)真菌均無(wú)抑菌作用。 將1號(hào)菌的胞外培養(yǎng)物60℃旋轉(zhuǎn)蒸干后加水溶解，通過(guò)液相萃取、薄層層析、硅膠柱層析，得到了抑制放線菌生長(zhǎng)的單一組分，并通過(guò)光譜法、雙縮尿法、PAGE(聚丙酰胺凝膠電泳)、三氯醋酸沉淀、Molisch反應(yīng)、葸酮反應(yīng)等對(duì)其進(jìn)行了初步鑒定，發(fā)現(xiàn)其在入=270nm時(shí)有最大光吸收值，初步鑒定為醛基或酮基的衍生物。 由于1號(hào)菌胞外抗菌活性物質(zhì)耐熱性、穩(wěn)定性較好，同時(shí)其水溶性較好、對(duì)G<'+>的抗性又明顯、4℃放置3個(gè)月后仍有活性，所以有較大的研究?jī)r(jià)值。 實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)3號(hào)菌的胞內(nèi)物也可抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)，以上這些都表明這3株黏細(xì)菌的研究具有實(shí)用性和新穎性價(jià)值。

著錄項(xiàng)

相似文獻(xiàn)

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