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【6h】

CpG基序重組質(zhì)粒增強(qiáng)小鼠免疫和抗病力的效應(yīng)

 

目錄

文摘

英文文摘

聲明

前言

1材料及方法

1.1材料

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 CpG1重組真核質(zhì)粒的構(gòu)建

1.2.2殼聚糖納米顆粒的制備

1.2.3免疫用質(zhì)粒DNA的大量制備

1.2.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、免疫和攻毒

1.2.5體液免疫反應(yīng)的檢測(cè)

1.2.6白細(xì)胞介素-2、4、6的檢測(cè)

1.2.7免疫小鼠外周血免疫細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化

1.2.8數(shù)據(jù)分析

2結(jié)果

2.1重組質(zhì)粒的鑒定

2.2小鼠血清IGG、IGM、IGA含量測(cè)定

2.2.1實(shí)驗(yàn)小鼠血清IgG、IgM、IgA含量測(cè)定(圖3.4)

2.3血清細(xì)胞因子含量測(cè)定

2.3.1非特異性免疫組細(xì)胞因子含量測(cè)定(圖3.5)

2.4免疫小鼠外周血免疫細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化

2.4.1非特異免疫小鼠外周血免疫細(xì)胞數(shù)量的動(dòng)態(tài)變化(圖3.6)

3討論

4結(jié)論

參考文獻(xiàn)

綜述 CpG-ODN研究進(jìn)展

1、概述

2、研究背景

3、分類

3.1.根據(jù)對(duì)人外周血單核細(xì)胞免疫效應(yīng)不同分類

3.2.根據(jù)免疫作用不同分類

4、CpG特征結(jié)構(gòu)和免疫刺激機(jī)理

4.1.CpG特征結(jié)構(gòu)

4.2.CpG-ODN的免疫刺激機(jī)理

5、CpG-ONA的免疫剌激功能

5.1激活B細(xì)胞

5.2誘導(dǎo)NK細(xì)胞活性

5.3刺激T細(xì)胞活性

5.4作用于巨噬細(xì)胞

6、CpGODN的佐劑效應(yīng)和治療作用

7、CpG與其他佐劑的比較

7.1與氫氧化鋁的比較

7.2與弗氏完全佐劑(CFA)的比較

8、影響CpG-DNA發(fā)揮作用的因素

8.1寡核苷酸中CpG結(jié)構(gòu)的序列、數(shù)量和兩個(gè)CpG之間的堿基數(shù)

8.2不同的CpG基序可能針對(duì)不同的免疫細(xì)胞發(fā)揮作用

8.3甲基化對(duì)CpG-DNA作用的影響

8.4不同抗原對(duì)CpG-DNA作用的影響

8.5 CpG-DNA的用量、使用方法以及途徑對(duì)免疫刺激效果的影響

9、CpG DNA的應(yīng)用前景

9.1疫苗佐劑的應(yīng)用

9.2對(duì)某些疾病的防治

9.3其它

10、CpG ODNs臨床應(yīng)用前景

10.1 CpG ODNs的抗感染效應(yīng)

10.2 CpG ODNs用于治療Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)疾病

10.3誘導(dǎo)腫瘤排斥反應(yīng)

10.4 CpG ODNs的毒副作用

11、問題與展望

參考文獻(xiàn)

在讀期間發(fā)表論文

致 謝

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摘要

為研制安全高效免疫調(diào)節(jié)劑增強(qiáng)動(dòng)物免疫抗病能力,本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合成含11個(gè)C pG基序的寡聚核苷酸,重組構(gòu)建含CpG的VR1012質(zhì)粒(VR1C);制備殼聚糖納米顆粒包裹重組質(zhì)粒(CNP-VR1C),肌注接種3周齡昆明小白鼠,設(shè)殼聚糖包裹空質(zhì)粒和生理鹽水對(duì)照組:接種后28天口服大腸桿菌攻毒觀察小鼠天然免疫的變化和對(duì)強(qiáng)毒感染的抵抗力,Sandwich ELISA測(cè)定血清免疫球蛋白和白細(xì)胞介素含量。研究結(jié)果表明:CNP-VR1C能顯著提高小鼠血清IgG、IgM和IgA含量,促進(jìn)小鼠血清IL-2、IL-6及IL-4顯著增多,同時(shí)淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞數(shù)量增加,與對(duì)照組小鼠差異顯著(P<0.05);攻毒后,CNP-VR1C接種小鼠的特異抗體、免疫球蛋白、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞、白細(xì)胞介素含量均較對(duì)照組顯著升高,無一發(fā)?。欢鴮?duì)照組除中性粒細(xì)胞數(shù)量攻毒后明顯高于免疫小鼠外,其余免疫水平均低于實(shí)驗(yàn)組,攻毒后均發(fā)病,消化道等組織呈現(xiàn)出血和腫脹等病變。這些結(jié)果表明:CpG基序插入真核質(zhì)粒構(gòu)建的VR1C用殼聚糖納米顆粒分子包裝后能顯著提高小鼠的天然免疫水平,增強(qiáng)對(duì)強(qiáng)毒感染的抵抗力;CNP-VRlC具有研制為分子高效安全免疫增強(qiáng)劑的應(yīng)用潛力。

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