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【6h】

一株大口鲇病原菌分離鑒定、系統(tǒng)發(fā)育分析、相關(guān)特性及生物防治的研究

 

目錄

聲明

摘要

前言

第一章大口鲇病原菌的分離、形態(tài)學(xué)觀察及生理生化鑒定

1.引言

2.材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

2.2實(shí)驗(yàn)儀器

2.3病原菌的分離

2.4大口鲇回歸感染試驗(yàn)

2.5病原菌的形態(tài)學(xué)觀察及生理生化試驗(yàn)

3.結(jié)果與分析

3.1病原菌的分離

3.2大口鲇回歸感染試驗(yàn)

3.3病原菌的形態(tài)學(xué)及生理生化特征

4.討論

4.1關(guān)于變形桿菌

4.2關(guān)于TWN3的致病性

4.3關(guān)于TWN3的鑒定

參考文獻(xiàn)

第二章大口鲇病原菌的分子鑒定及系統(tǒng)發(fā)育分析

1.引言

2.材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

2.2實(shí)驗(yàn)儀器

2.3病原菌TWN3DNA的G+C含量測(cè)定

2.4病原菌TWN3的16S rDNA序列測(cè)定

2.5 16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析

3.結(jié)果與分析

3.1病原菌TWN3DNA的G+C含量測(cè)定結(jié)果

3.2病原菌TWN3的16S rDNA序列測(cè)定結(jié)果

3.3 16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析

4.討論

4.1關(guān)于普通變形桿菌和分類研究

4.2關(guān)于細(xì)菌鑒定

參考文獻(xiàn)

第三章病原菌普通變形桿菌TWN3株相關(guān)特性的研究

1.引言

2.材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

2.2實(shí)驗(yàn)儀器

2.3 TWN3的生長(zhǎng)特性測(cè)定

2.4溶血試驗(yàn)

2.5 KM小鼠致病和鯽魚人工感染試驗(yàn)

2.6藥敏試驗(yàn)

3.結(jié)果分析

3.1 TWN3的生長(zhǎng)特性

3.2溶血試驗(yàn)結(jié)果

3.3 KM小鼠的致病性和鯽魚人工感染結(jié)果

3.4藥敏試驗(yàn)結(jié)果

4.討論

4.1關(guān)于普通變形桿TWN3的特性和病理學(xué)

4.2關(guān)于普通變形桿TWN3的感染途徑及防治

參考文獻(xiàn)

第四章病原菌普通變形桿菌TWN3株生物防治的研究

1.引言

2.材料與方法

2.1實(shí)驗(yàn)材料

2.2實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所與條件

2.3實(shí)驗(yàn)儀器

2.4蛭弧菌BDTW11菌株的培養(yǎng)及效價(jià)測(cè)定

2.5普通變形桿菌TWN3株對(duì)鯽和鯉的感染及鯽感染模型的建立

2.6蛭弧菌BDTW11對(duì)鯽的安全性試驗(yàn)

2.7蛭弧菌BDTW11對(duì)病原TWN3裂解力的測(cè)定

2.8蛭弧菌BDTW11制劑的擴(kuò)大培養(yǎng)

2.9蛭弧菌BDTW11對(duì)病原TWN3的防治試驗(yàn)

3.結(jié)果與分析

3.1蛭弧菌BDTW11株的培養(yǎng)及效價(jià)測(cè)定結(jié)果

3.2普通變形桿菌TWN3株對(duì)魚類的感染及鯽感染模型的建立

3.3蛭弧菌BDTW11對(duì)鯽的安全性試驗(yàn)

3.4 BDTW11對(duì)TWN3裂解的作用

3.5蛭弧菌BDTW11制劑的擴(kuò)大培養(yǎng)結(jié)果

3.6蛭弧菌BDTW11對(duì)病原TWN3的防治結(jié)果

4.討論

4.1關(guān)于防治試驗(yàn)中TWN3致病力整體偏低

4.2關(guān)于TWN3的感染途徑與防治

4.3關(guān)于蛭弧菌在實(shí)際生產(chǎn)中的應(yīng)用

參考文獻(xiàn)

總結(jié)

文獻(xiàn)綜述:細(xì)菌分類學(xué)鑒定原則及方法的概述

在讀期間發(fā)表論文情況及其他獲獎(jiǎng)情況

致謝

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摘要

大口鲇是中國(guó)特有的名貴魚類,抗病性強(qiáng),成魚養(yǎng)殖階段很少患病。2005年10月,四川成都周邊及四川鯰科魚類養(yǎng)殖場(chǎng)大口鲇成魚大規(guī)模死亡,病魚體表無明顯潰爛,胃腸漿膜水腫充血,腸道甚至糜爛狀壞死,肝臟有斑點(diǎn)狀壞死,與以往報(bào)道不同。從瀕死的大口鲇(Silurus meridionalis Chen)體內(nèi)分離到3株優(yōu)勢(shì)菌,人工感染試驗(yàn)表明菌株TWN3致病性最強(qiáng)。通過形態(tài)學(xué)觀察,該菌革蘭氏染色陰性,大多直桿狀,具運(yùn)動(dòng)性,無莢膜,周生鞭毛,不產(chǎn)芽孢,結(jié)合生理生化測(cè)定,確定為變形桿菌(Proteus)。通過設(shè)計(jì)引物,獲得TWN316S rDNA序列,其序列與普通變形桿菌(Proteus vulgaris)同源性最高,最高相似性為99.52%;系統(tǒng)發(fā)育分析表明,TWN3與P vulgaris位于同一分支,結(jié)合其DNA的G+Cmol%測(cè)定結(jié)果,39.1%,可確定TWN3為普通變形桿菌(Proteus vulgaris)。再根據(jù)蔗糖、甘油、麥芽糖、D-木糖氧化、水楊苷、七葉靈等生理生化特性,可進(jìn)一步確定TWN3屬于普通變形桿菌(Proteus vulgaris)中的P.vulgaris BG3。TWN3株相關(guān)特性研究表明,該菌不溶血;對(duì)慶大霉素、卡那霉素、痢特靈、諾氟沙星4種藥物敏感,對(duì)紅霉素、頭孢拉定、青霉素、四環(huán)素等藥物不敏感;TWN3對(duì)鯽魚和小鼠均有較強(qiáng)感染性,發(fā)病具爆發(fā)性。生長(zhǎng)特性研究表明,TWN3生長(zhǎng)迅速,在溫度25℃~39℃、pH 6.0~10.0、鹽度0.5%~3.5%范圍生長(zhǎng)較好,最適條件分別為溫度37℃、pH6.0、鹽度1.5%。普通變形桿菌致病性廣泛,但作為養(yǎng)殖大口鲇的病原國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。TWN3菌株的發(fā)現(xiàn),豐富了大口鲇細(xì)菌性病原,對(duì)大口鲇疾病防治有重要意義。另外,普通變形桿菌分類學(xué)研究有待進(jìn)一步深入完善,TWN3的鑒定,對(duì)普通變形桿菌分類學(xué)研究也有著積極意義。通過對(duì)已分離獲得的蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)BDTW11 菌株鯽魚安全性試驗(yàn)及對(duì)普通變形桿菌(Proteus vulgaris)TWN3株裂解能力的測(cè)定,在建立普通變形桿菌(Proteus vulgaris)TWN3株感染鯽試驗(yàn)?zāi)P突A(chǔ)上,以蛭弧菌BDTW11與病原TWN3,1:10的數(shù)量比,自然養(yǎng)殖條件下,進(jìn)行生物防治試驗(yàn),統(tǒng)計(jì)鯽的死亡數(shù)量,分析防治效果。結(jié)果表明:采用腹腔注射TWN3和BDTW11混合液對(duì)鯽進(jìn)行感染和防治,鯽的存活率與對(duì)照組差異最顯著,提高了10.8%;灌腸法次之,比對(duì)照組提高了6.6%;浸泡法了提高3.3%。目前,較大規(guī)模露天養(yǎng)殖條件下,魚類細(xì)菌性病原的蛭弧菌防治報(bào)道不多,利用其對(duì)普通變形桿菌病原進(jìn)行防治尚屬首次。另外,以大腸桿菌和TWN3為宿主菌,進(jìn)行BDTW11擴(kuò)大培養(yǎng)試驗(yàn),結(jié)果表明:以大腸桿菌作宿主菌擴(kuò)大培養(yǎng)結(jié)果不明顯,而以TWN3作宿主菌,擴(kuò)大培養(yǎng)效果顯著。 以上研究對(duì)普通變形桿菌分類學(xué)、大口鲇疾病的防治、普通變形桿菌此類病原的疾病防治及蛭弧菌制劑的實(shí)際應(yīng)用都具有一定的學(xué)術(shù)價(jià)值和參考價(jià)值。此外,對(duì)普通變形桿菌分類學(xué)、TWN3株生長(zhǎng)特性、感染途徑、生物防治及蛭弧菌生產(chǎn)應(yīng)用進(jìn)行了討論。

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