膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞治療創(chuàng)傷性脊髓損傷

李曉寅; 楊曉青; 陳淑蓮; 李正超; 王梓琪; 宋震; 朱達(dá)仁; 陳旭義

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背景:隨著交通事故、墜落傷、運(yùn)動損傷等不斷增多,創(chuàng)傷性脊髓損傷已成為危及脊髓健康的一個(gè)重要問題。目的:探討膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞治療創(chuàng)傷性脊髓損傷的療效。方法:①分別提取膠原和絲素蛋白原料,將二者以質(zhì)量比2∶4混合,采用真空冷凍干燥法制備膠原/絲素蛋白支架;將第3代GFP小鼠神經(jīng)干細(xì)胞接種至膠原/絲素蛋白支架上,光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡下觀察神經(jīng)干細(xì)胞生長情況。②采用隨機(jī)數(shù)字表達(dá)將40只成年SD大鼠分5組,正常組不進(jìn)行任何處理,模型組建立T10段脊髓缺損模型,干細(xì)胞組脊髓缺損處注射神經(jīng)干細(xì)胞,支架組脊髓缺損處植入膠原/絲素蛋白支架,聯(lián)合組脊髓缺損處植入接種神經(jīng)干細(xì)胞的膠原/絲素蛋白支架,每組8只。術(shù)后每周進(jìn)行曠場實(shí)驗(yàn)BBB評分和斜坡實(shí)驗(yàn),術(shù)后第8周行神經(jīng)誘發(fā)電位檢測、蘇木精-伊紅和免疫熒光染色,評價(jià)創(chuàng)傷性脊髓損傷大鼠恢復(fù)情況。結(jié)果與結(jié)論:①光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡下觀察顯示,膠原/絲素蛋白支架上有利于神經(jīng)干細(xì)胞的黏附、伸展與分化。②曠場實(shí)驗(yàn)BBB評分和斜坡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,脊髓損傷各組大鼠的運(yùn)動功能隨時(shí)間的延長均有不同程度的恢復(fù),各治療組大鼠的運(yùn)動功能的恢復(fù)速度與程度均優(yōu)于模型組,其中以聯(lián)合組大鼠運(yùn)動功能恢復(fù)最好。術(shù)后第8周,脊髓損傷后各治療組大鼠的運(yùn)動誘發(fā)電位和體感誘發(fā)電位的潛伏期、振幅檢測結(jié)果均優(yōu)于模型組(P<0.05),聯(lián)合組檢測結(jié)果優(yōu)于干細(xì)胞組、支架組(P<0.05)。術(shù)后第8周蘇木精-伊紅染色顯示,模型組大鼠脊髓損傷部位修復(fù)效果最差,聯(lián)合組修復(fù)效果最好;免疫熒光染色顯示,模型組大鼠脊髓損傷部位神經(jīng)絲蛋白陽性細(xì)胞最少,各治療組神經(jīng)絲蛋白陽性細(xì)胞均多于模型組,其中以聯(lián)合組最多。③膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞對創(chuàng)傷性脊髓損傷大鼠雙下肢功能改善和脊髓組織修復(fù)具有一定效果。