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Duale genetische Kodierung von Acetyllysin und nicht-hydrolysierbarem Thioacetyllysin mittels Flexizym

機(jī)譯：使用彈性酶對(duì)乙酰賴氨酸和不可水解的硫代乙酰賴氨酸進(jìn)行雙重遺傳編碼

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摘要

Die Acetylierung von Lysin-Bausteinen ist eine wichtige posttranslationale Proteinmodifikation. Die Lysin-Acetylierung in Histonproteinen und deren Interaktion mit anderen posttranslationalen Modifikationen in Histon- und nicht-Histon-Proteinen ist essentiell bei der DNA-Replikation, DNA-Reparatur und Transkriptionsregulation. Wir verwendeten die Flexizym-Technologie, um die Aminos uren Acetyllysin (AcK) und nicht-hydrolysierbares Thioacetyllysin (Thio-AcK) in vitro in intakte Proteine einzubauen. ThioAcK und AcK wurden in humanes Histon H3 positionsspezifisch in-korporiert. Dies erfolgte entweder individuell oder paarweise bei verschiedenen Lysin-Positionen innerhalb des humanen Histon H3. Die Thioacetylgruppe im Histon H3 konnte nicht durch die Histon-Deacetylase Sirtuin (Typ 1) abgespalten werden, wie durch diese Studie gezeigt wurde. Diese Methode des AcK- und ThioAcK-Einbaus stellt ein wichtiges Werkzeug für die Untersuchung der Protein-Acetylierung sowie deren Rolle in der Interaktion mit weiteren posttranlationalen Modifizierungen dar.
機(jī)譯：賴氨酸結(jié)構(gòu)單元的乙?；侵匾姆g后蛋白質(zhì)修飾。組蛋白中的賴氨酸乙?；约八鼈兣c組蛋白和非組蛋白中其他翻譯后修飾的相互作用對(duì)于DNA復(fù)制，DNA修復(fù)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控至關(guān)重要。我們使用Flexizym技術(shù)將氨基酸乙酰賴氨酸（AcK）和不可水解的硫代乙酰賴氨酸（Thio-AcK）整合到體外完整蛋白中。將ThioAcK和AcK以位置特異性方式摻入人組蛋白H3中。這是在人組蛋白H3中的不同賴氨酸位置上單獨(dú)或成對(duì)完成的。如本研究所示，組蛋白H3中的硫代乙?；荒鼙唤M蛋白脫乙酰基酶沉默調(diào)節(jié)蛋白（1型）分離。這種AcK和ThioAcK摻入方法代表了研究蛋白質(zhì)乙酰化及其在與其他翻譯后修飾相互作用中的作用的重要工具。

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