摘要： 背景:HLA-DR基因異常表達(dá)與多種腫瘤的進(jìn)展及預(yù)后相關(guān),采用CRISPR/Cas9技術(shù)編輯子宮內(nèi)膜癌HLA-DRA基因的研究目前國(guó)內(nèi)外尚未見報(bào)道。目的:利用CRISPR/Cas9技術(shù)對(duì)HEC-1-A細(xì)胞的HLA-DRA基因靶向敲除,檢測(cè)其敲除效率,并初步探索HLA-DRA基因的功能。方法:根據(jù)HLA-DRA基因序列,針對(duì)HLA-DRA外顯子設(shè)計(jì)單鏈向?qū)NA(sgRNA),分別將sgRNA、CRISPR/Cas9、增強(qiáng)綠色熒光蛋白和嘌呤霉素抗性克隆至YKO載體中,通過脂質(zhì)體將sgRNA表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到HEC-1-A細(xì)胞中。根據(jù)熒光表達(dá),觀察評(píng)估sgRNA敲除效果后,使用表達(dá)sgRNA的質(zhì)粒進(jìn)行轉(zhuǎn)染,用最佳濃度的嘌呤霉素篩選,獲得穩(wěn)定的綠色熒光蛋白陽性表達(dá)細(xì)胞后,進(jìn)行PCR、基因測(cè)序、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。結(jié)果與結(jié)論:經(jīng)轉(zhuǎn)染和嘌呤霉素篩選后,獲得穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白的HEC-1-A細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行Sanger測(cè)序分析,結(jié)果顯示HEC-1-A細(xì)胞中HLA-DRA第一號(hào)外顯子基因被定向敲除,對(duì)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果進(jìn)行差異基因篩選,根據(jù)篩選所得686個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行GO富集分析和KEGG富集分析,構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)圖,通過對(duì)腫瘤增殖分化有關(guān)差異基因分析發(fā)現(xiàn)COL3A1、BCL2A1、TACSTD2、CXCR2等基因表達(dá)上調(diào),GNG11、BMP7、IL1RN、PLEK2、CDH6等基因表達(dá)下調(diào)。結(jié)果可見,HLA-DRA基因參與了多種器官、組織和細(xì)胞的功能調(diào)控過程。此外,HLA-DRA基因可能通過2種途徑(上調(diào)/下調(diào))調(diào)控子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞的增殖、分化、遷移及侵襲過程。此研究建立了CRISPR/Cas9技術(shù)聯(lián)合脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的單質(zhì)粒基因敲除方法,首次敲除子宮內(nèi)膜癌免疫相關(guān)基因HLA-DRA,為子宮內(nèi)膜癌免疫治療的研究奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

摘要： 背景:人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化過程受多種因素影響。研究證實(shí),長(zhǎng)鏈非編碼RNAs在表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄以及轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控等過程中扮演著重要角色,而目前其在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化過程中表達(dá)譜的改變以及調(diào)控作用鮮有報(bào)道。目的:探討人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化過程中差異表達(dá)長(zhǎng)鏈非編碼RNAs及其功能。方法:以人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨誘導(dǎo)分化0 d(未誘導(dǎo)組)、14 d(誘導(dǎo)組)細(xì)胞為研究對(duì)象,利用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)篩選成軟骨誘導(dǎo)分化前后差異表達(dá)倍數(shù)變化2倍及以上的長(zhǎng)鏈非編碼RNAs和mRNAs,并通過qRT-PCR對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。采用生物信息學(xué)分析對(duì)差異表達(dá)基因行GO功能分析和KEGG通路富集分析,并篩選長(zhǎng)鏈非編碼RNAs鄰近基因以及共表達(dá)基因。結(jié)果與結(jié)論:①與未誘導(dǎo)組相比,誘導(dǎo)組中顯著差異表達(dá)的長(zhǎng)鏈非編碼RNAs共有816條,mRNAs共有5138條;②GO功能和KEGG信號(hào)通路分析發(fā)現(xiàn),差異表達(dá)基因富集的主要生物學(xué)過程包括細(xì)胞進(jìn)程、生物調(diào)節(jié)和代謝過程等;主要通路包括黏附斑激酶、胰島素信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路等;③對(duì)差異表達(dá)長(zhǎng)鏈非編碼RNAs行鄰近基因和共表達(dá)基因分析發(fā)現(xiàn),部分長(zhǎng)鏈非編碼RNAs如SNHG16、XLOC_003886可能在脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化和軟骨退變中發(fā)揮重要作用;④結(jié)果表明,長(zhǎng)鏈非編碼RNA的表達(dá)譜在脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成軟骨分化過程中發(fā)生了明顯改變;差異表達(dá)長(zhǎng)鏈非編碼RNAs的生物學(xué)功能可能與鄰近基因和共表達(dá)基因功能密切相關(guān),從而調(diào)控脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化。然而,其具體調(diào)控作用和分子機(jī)制有待實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

摘要： 背景:近來發(fā)現(xiàn)骨髓炎環(huán)境會(huì)顯著抑制骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化能力,進(jìn)而對(duì)骨形成和骨代謝造成影響,但其具體的作用機(jī)制尚不十分清楚。目的:通過對(duì)葡萄球菌A蛋白作用下誘導(dǎo)成骨分化的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組分析,尋找潛在差異表達(dá)長(zhǎng)鏈非編碼RNA(lncRNA)及相關(guān)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。方法:將大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組,前者在葡萄球菌A蛋白(1μg/mL)模擬的骨髓炎環(huán)境下成骨誘導(dǎo)分化7,14 d,后者正常成骨誘導(dǎo)分化7,14 d;通過茜素紅染色以及堿性磷酸酶活性檢測(cè)觀察兩組細(xì)胞成骨誘導(dǎo)分化情況;收集兩組細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,進(jìn)行GO、KEGG生物信息學(xué)分析;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)一步驗(yàn)證差異表達(dá)lncRNA。結(jié)果與結(jié)論:①成骨誘導(dǎo)分化7,14 d,對(duì)照組茜素紅著色面積均高于實(shí)驗(yàn)組,對(duì)照組堿性磷酸酶活性明顯高于實(shí)驗(yàn)組(P<0.01);②轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果顯示328個(gè)lncRNAs表達(dá)差異,其中顯著上調(diào)的184個(gè),顯著下調(diào)的144個(gè);③基因本體富集分析發(fā)現(xiàn)差異表達(dá)基因功能主要涉及生物過程、細(xì)胞組分以及分子功能,KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)主要參與的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑有腫瘤壞死因子信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、腸道炎癥疾病通路等,與骨形成、骨代謝相關(guān);④選取與成骨分化相關(guān)的差異表達(dá)明顯的6個(gè)lncRNAs,qPCR驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)ENSRNOT00000092811、TCONS_00023877、XR_001836916.1與高通量測(cè)序中的表達(dá)趨勢(shì)一致;⑤結(jié)果表明,多個(gè)lncRNA參與骨髓炎狀態(tài)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化能力調(diào)節(jié),且可能通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑腫瘤壞死因子信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等發(fā)揮作用。

摘要： 為了探究白榆二倍體及其同源四倍體的基因表達(dá)譜差異情況,以白榆二倍體及其同源四倍體為材料,比較二者成熟葉片的生理特征并采摘幼嫩葉片進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析。結(jié)果顯示,與二倍體相比,同源四倍體丙二醛含量、可溶性蛋白含量及葉綠素含量增加,可溶性糖含量降低。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果共得到2407個(gè)差異表達(dá)基因,其中上調(diào)基因?yàn)?076個(gè),下調(diào)基因?yàn)?331個(gè)。在COG蛋白質(zhì)的同源注釋分析得到918個(gè)差異表達(dá)基因,主要涉及21個(gè)方面。共有1380個(gè)差異表達(dá)基因被GO注釋,主要與細(xì)胞組分、代謝功能、催化活性等相關(guān)。通過KEGG通路注釋發(fā)現(xiàn),共有930個(gè)差異表達(dá)基因分布到5大類KEGG通路中,其中以代謝機(jī)制中差異表達(dá)基因被注釋到的最多。葉綠素含量的增加使四倍體的葉片顏色變得更加濃綠,丙二醛、可溶性糖、可溶性蛋白的含量的增加與減少與四倍體植物在植物代謝與生長(zhǎng)上有一定關(guān)系,經(jīng)過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析,糖酵解途徑的基因表達(dá)為下調(diào),還原性戊糖磷酸循環(huán)與光呼吸等與葉綠體有關(guān)的基因?yàn)樯险{(diào)。

摘要： 背景:炎癥小體在脊髓損傷后發(fā)揮重要作用,凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白是炎癥小體的共同接頭蛋白.作者前期的研究表明,一種特異性的凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白寡聚阻斷劑CRID3,可以通過抑制凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白寡聚化而抑制炎癥小體的活化和相應(yīng)細(xì)胞因子的產(chǎn)生,進(jìn)而改善損傷脊髓局部微環(huán)境,發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用.但是其在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)損傷脊髓的影響尚未見報(bào)道.目的:采用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)分析CRID3對(duì)小鼠脊髓損傷急性期(8 h)局部基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)的影響.方法:共取雌性8周齡C57BL/6小鼠30只,體質(zhì)量18-20 g,隨機(jī)分為假手術(shù)組和脊髓損傷組,將脊髓損傷后的小鼠分為模型對(duì)照組和給藥組,給藥組術(shù)后腹腔注射CRID3(50 mg/kg),對(duì)照組只注射等體積的生理鹽水.脊髓損傷后8 h,每組各灌注取材3只小鼠,取脊髓冰凍切片進(jìn)行蘇木精-伊紅染色,確定損傷模型是否成功.損傷后8 h每組各取3只小鼠,取脊髓提取純化總RNA,進(jìn)行文庫制備和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,用DESeq2軟件分析3組模型的差異基因表達(dá).同轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,模型對(duì)照組和給藥組各取6只小鼠脊髓提取純化總RNA,采用反轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR方法驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果.用GOseq R軟件和KOBAS軟件對(duì)差異基因分別進(jìn)行基因本體分析和京都基因與基因組百科全書富集分析;結(jié)合文獻(xiàn)挖掘與炎癥小體相關(guān)的信號(hào)通路、深入分析CRID3對(duì)其相關(guān)基因表達(dá)的影響;與CRID3作用相關(guān)的基因表達(dá)蛋白String互作分析.結(jié)果 與結(jié)論:①蘇木精-伊紅染色結(jié)果表明脊髓損傷模型構(gòu)建成功;②轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果分析顯示,與假手術(shù)組比較,模型對(duì)照組有5661個(gè)差異表達(dá)基因,其中包括3427個(gè)上調(diào)和2224個(gè)下調(diào)基因;與模型對(duì)照組比較,給藥組有2924個(gè)差異表達(dá)基因,其中包含1409個(gè)上調(diào)基因和1515個(gè)下調(diào)基因;③基因本體分析結(jié)果表明,差異表達(dá)的基因主要富含趨化因子受體結(jié)合、G-蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合、細(xì)胞外-谷氨酸門控離子通道活性、興奮性胞外配體門控離子通道活性、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性、酸性磷酸酶活性等;④京都基因與基因組百科全書分析結(jié)合文獻(xiàn)挖掘表明,與炎癥小體相關(guān)的信號(hào)通路主要包括腫瘤壞死因子、Toll樣受體、核因子κB、PI3K-Akt、缺氧誘導(dǎo)因子1、MAPK、NOD-樣受體信號(hào)通路以及細(xì)胞焦亡、白細(xì)胞跨內(nèi)皮遷移、細(xì)胞因子與其受體相互作用等;⑤CRID3最敏感的基因包括Asc、Casp4、Cyba、Cybb、F11r、Hif1a、Il18、Il1b、Itgal、Itgam、Itgb2、Jam3、Mmp3、Mmp9、Tlr4等;⑥String蛋白互作分析表明炎癥小體組成成分Nlrp1、Nlrp3、Nlrp6、Nlrc4、Aim2、ASC、Csap1和Csap4相互作用密切,并且它們又通過Csap8與白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素18形成完整的鏈接;此外還有一些重要的節(jié)點(diǎn)蛋白,如Actn1、Cxcl5、Cd14、Cyba、Cybb、Fgf2、Hif1a、F11r、Itgal、Itga2b、Itgam、Itgb1、Jam3、Mmp3、Tlr4等被確定;⑦結(jié)果表明,脊髓損傷后可以激活大量與炎癥小體活化相關(guān)的基因表達(dá),這些表達(dá)基因形成的信號(hào)通路可能是炎癥小體活化的原因也可能是其活化的結(jié)果;CRID3可以通過抑制炎癥小體相關(guān)基因的表達(dá)直接或間接導(dǎo)致脊髓損傷急性期基因表達(dá)抑制,其相關(guān)的分子和信號(hào)通路主要與炎癥反應(yīng)、局部缺氧、細(xì)胞的黏附、遷移、分化、增殖和凋亡有關(guān),提示在脊髓損傷急性期應(yīng)用CRID3可改善脊髓損傷局部微環(huán)境,這些關(guān)鍵的節(jié)點(diǎn)分子也可以作為新的治療干預(yù)靶點(diǎn).

摘要： 為了探索紅望天眼金魚Carassius auratus的變色機(jī)制,采用RNA-Seq高通量測(cè)序技術(shù),對(duì)紅望天眼金魚(145日齡,體長(zhǎng)6 cm)由灰色、過渡色到橙紅色3個(gè)變色階段進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析。結(jié)果表明:共得到過濾后堿基量57.8 Gb,構(gòu)建了新轉(zhuǎn)錄本并預(yù)測(cè)新基因1629個(gè),在兩兩組比較的差異表達(dá)基因群中分析出3個(gè)變色組共有差異表達(dá)基因25個(gè);差異表達(dá)基因的GO功能富集和KEGG通路富集分析顯示,差異基因主要富集到免疫反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡和黑色素等相關(guān)通路;根據(jù)轉(zhuǎn)錄組比較分析結(jié)果和實(shí)際生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)觀察積累,初步推測(cè)紅望天眼金魚變色的生理機(jī)制是紅望天眼金魚變色初期黑色素細(xì)胞大量增殖,期間發(fā)生免疫炎癥反應(yīng),隨后黑色素細(xì)胞開始逐漸凋亡,同時(shí)其他色素細(xì)胞則逐漸增殖分化,直至完全取代黑色素細(xì)胞,完成變色過程。本研究初步分析出了紅望天眼金魚的皮膚變色機(jī)制,研究結(jié)果可為進(jìn)一步開展調(diào)控金魚變色的功能基因試驗(yàn)和金魚變色的分子機(jī)理研究提供科學(xué)參考。

摘要： 本研究以風(fēng)輪菜(Clinopodium chinense(Benth.)O.Kuntze)為材料,采用BGISEQ-500測(cè)序平臺(tái)對(duì)風(fēng)輪菜根、莖和葉的小RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,并對(duì)其黃酮類物質(zhì)合成途徑中參與調(diào)控的microRNA(miRNA)及其靶基因進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示,鑒定出的保守miRNA有86個(gè),屬于26個(gè)家族,新發(fā)現(xiàn)miRNA 8個(gè),篩選出風(fēng)輪菜黃酮類物質(zhì)合成途徑中調(diào)控3個(gè)關(guān)鍵酶的候選miRNA(novel_mir3、miR167d-5p、miR396h)。通過對(duì)靶基因編碼的關(guān)鍵酶4-香豆酸輔酶A連接酶進(jìn)行序列分析和同源建模,發(fā)現(xiàn)其具有高度保守的底物結(jié)合區(qū)域、催化結(jié)構(gòu)域及兩個(gè)保守的肽基序。

摘要： 為探究光照強(qiáng)度對(duì)紫葉稠李花色素苷合成途徑上關(guān)鍵基因及轉(zhuǎn)錄因子的影響,對(duì)紫葉稠李進(jìn)行80%遮光處理,通過無參轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,分析差異基因表達(dá)量、功能及富集通路情況。結(jié)果表明:差異基因主要富集在類黃酮生物合成途徑。對(duì)花色素苷合成途徑相關(guān)的差異基因進(jìn)行熒光定量PCR驗(yàn)證,結(jié)果顯示,相對(duì)全光照條件下,遮光處理下PAL、CHS、CHI、F3H、F3’H、DFR、ANS、UFGT基因表達(dá)量下調(diào),MYB6、MYB10轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)量相對(duì)上調(diào)。

摘要： 紫肉甘薯因其塊根中富含紫色花青素而得名。本研究以2組栽培種紫肉甘薯及其淡黃肉突變體為材料,基于甘薯轉(zhuǎn)錄組測(cè)序(RNA-seq)數(shù)據(jù)進(jìn)行生物信息學(xué)分析。以|log_(2) FC|≥1且錯(cuò)誤發(fā)現(xiàn)率(FDR)<0.01作為篩選標(biāo)準(zhǔn),鑒定差異表達(dá)基因(DEGs),對(duì)DEGs進(jìn)行GO功能分類和KEGG代謝通路分析,并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)方法對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。樣品經(jīng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序后,均獲得超過8 Gb的高質(zhì)量數(shù)據(jù),拼接組裝共得到164427條Unigenes。在2組甘薯材料及其突變體中分別檢測(cè)到2262個(gè)和1546個(gè)DEGs,其中有244個(gè)DEGs是2組甘薯材料共有的。GO功能分析發(fā)現(xiàn),DEGs主要富集于苯丙氨酸解氨酶活性、著色、類黃酮生物合成過程、含花青素化合物生物合成過程等。KEGG通路分析發(fā)現(xiàn),DEGs主要分布在苯丙素類生物合成、苯丙氨酸代謝、類黃酮生物合成和花青素生物合成等代謝通路。隨機(jī)選擇27個(gè)與花青素生物代謝相關(guān)的候選基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證,表達(dá)模式與測(cè)序結(jié)果一致。將2組材料中候選基因的表達(dá)水平與花青素含量進(jìn)行相關(guān)性分析,結(jié)果表明,花青素生物合成相關(guān)的候選基因PAL-1、CHS、ANS、CCoAOMT、GST-2、ABC-1、bHLH和WRKY-2的相對(duì)表達(dá)量與花青素積累量的相關(guān)性達(dá)到顯著或極顯著水平。表明,2個(gè)甘薯突變體材料塊根薯肉紫色的缺失是由花青素的合成、轉(zhuǎn)運(yùn)和相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)水平的降低共同引起的。通過轉(zhuǎn)錄組測(cè)序可以從中挖掘一些與花青素代謝相關(guān)的候選基因,為研究其在生物合成途徑中的調(diào)控機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

摘要： 目的應(yīng)用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)分析PM_(2.5)處理后小鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的基因表達(dá)譜變化及其功能與信號(hào)通路。方法小鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞MLE-12分為對(duì)照組(無處理)和PM_(2.5)組(100μg/mL PM_(2.5)處理),分別處理24 h后提取兩組細(xì)胞RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。所得序列經(jīng)質(zhì)控后,利用差異分析軟件edgeR篩選出差異表達(dá)基因,使用clusterProfile軟件進(jìn)行差異表達(dá)基因的GO功能富集和KEGG通路富集分析。選擇KEGG富集分析中化學(xué)致癌通路的10個(gè)較感興趣的差異表達(dá)基因,采用q-PCR法檢測(cè)其mRNA表達(dá),分別計(jì)算各差異表達(dá)基因通過q-PCR法、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的PM_(2.5)組/對(duì)照組比值,對(duì)比q-PCR法測(cè)出的基因表達(dá)變化是否與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序測(cè)出的基因表達(dá)變化一致,以驗(yàn)證測(cè)序的準(zhǔn)確性。結(jié)果共篩選到1151個(gè)差異表達(dá)基因,其中下調(diào)基因688個(gè),上調(diào)基因483個(gè)。GO功能與KEGG信號(hào)通路富集分析結(jié)果顯示,差異基因主要富集在膽固醇代謝、調(diào)節(jié)趨化作用、細(xì)胞黏附、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性等功能及化學(xué)致癌性、細(xì)胞外基質(zhì)—受體交互、類固醇生物合成、谷胱甘肽代謝等通路上。選擇Gstt1、Gsta1、Gstm1、Gstm7、Gsta3、Gstp2、Ptgs2、Gsta4、Aldh3b1、Aldh3b2進(jìn)行差異表達(dá)基因驗(yàn)證,其中Gsta1、Gsta3、Gsta4、Gstm1、Gstm7、Gstt1、Gstp2屬于谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)家族;q-PCR法檢測(cè)結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果均顯示,Gsta1、Gsta3、Ptgs2、Gsta4、Aldh3b1、Aldh3b2表達(dá)上調(diào),Gstt1、Gstm1、Gstm7、Gstp2表達(dá)下調(diào),q-PCR法測(cè)得各基因表達(dá)變化均與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的趨勢(shì)一致(P均<0.05)。結(jié)論P(yáng)M_(2.5)可導(dǎo)致MLE-12細(xì)胞基因表達(dá)譜發(fā)生變化,差異基因主要富集在膽固醇代謝、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性等功能及化學(xué)致癌性、谷胱甘肽代謝等信號(hào)通路,PM_(2.5)導(dǎo)致細(xì)胞毒性的機(jī)制可能為通過減弱GST的解毒功能而影響化學(xué)致癌通路。

摘要： 研究姜花二倍體形成四倍體過程中與mRNA對(duì)應(yīng)的DNA序列上的SSR是否發(fā)生變異,為探索四倍體白姜花性狀發(fā)生變化可能的遺傳機(jī)制奠定基礎(chǔ).在前期轉(zhuǎn)錄組測(cè)序基礎(chǔ)上,統(tǒng)計(jì)SSR位點(diǎn),設(shè)計(jì)特異SSR引物,提取二倍體和四倍體白姜花的葉片DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序,分析比較SSR位點(diǎn)在兩者之間的差異.結(jié)果表明:10個(gè)SSR位點(diǎn)核心序列為(AG)n,7個(gè)SSR位點(diǎn)在四倍體和二倍體上基因型一致,未發(fā)生變異;3個(gè)雜合位點(diǎn)基因型尚不能判斷.同時(shí),在3個(gè)SSR位點(diǎn)篩選出A＞C或者A＞G的SNP,而且在四倍體和二倍體姜花植株中相同.

摘要： 為充分挖掘東海帶魚基因資源,開發(fā)東海帶魚微衛(wèi)星標(biāo)記,本研究以東海帶魚轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)為基礎(chǔ),采用MISA軟件進(jìn)行其微衛(wèi)星數(shù)據(jù)的分析.結(jié)果共獲得SSR總數(shù)為49311個(gè),其中完整的微衛(wèi)星共有44625個(gè),復(fù)合型SSR數(shù)目為4687個(gè).SSR bp片段長(zhǎng)度由11至374不等.重復(fù)長(zhǎng)度小于20bp的序列,有30997條,占總數(shù)的69.46％.其中在11～15bp的數(shù)量最多,16～20次之.此外,本研究結(jié)果顯示東海帶魚SSR中共有68種重復(fù)基元,二、三、四、五、六堿基重復(fù)基元分別有4、10、26、17、9種.除單核苷酸類型外,二堿基重復(fù)SSR含量最高,約占總數(shù)的30.63％,其中出現(xiàn)的頻率最多的是(AC/GT)n.本研究的結(jié)果,可為今后帶魚的微衛(wèi)星分子標(biāo)記開發(fā)、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建、以及種質(zhì)資源保護(hù)等提供重要科學(xué)依據(jù).

摘要： 為研究商陸皂苷甲的生物合成途徑,利用Illumina HiSeq4000高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)商陸幼苗進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,得到9.60Gb clean data,經(jīng)Trinity軟件組裝后獲得63957條unigenes,平均長(zhǎng)度988.82bp,其中24517條unigenes(38.33％)能被Nr、Swiss-Prot、COG、KOG、Pfam、GO、KEGG等公共數(shù)據(jù)庫注釋.對(duì)注釋得到的unigenes進(jìn)行KEGG代謝通路分析,發(fā)現(xiàn)商陸轉(zhuǎn)錄組中有53個(gè)unigenes參與萜類骨架合成通路,有8個(gè)unigenes參與三萜合成通路,還有417個(gè)unigenes參與商陸其他次生代謝途徑.進(jìn)一步分析參與商陸皂苷甲生物合成后修飾酶相關(guān)基因,發(fā)現(xiàn)有130個(gè)unigenes可能具有CYP450的功能,參與商陸次生代謝產(chǎn)物的氧化/羥基化修飾;有46個(gè)unigenes與糖基轉(zhuǎn)移酶UGT相關(guān).商陸轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的獲得為研究商陸皂苷甲和其他次生代謝產(chǎn)物的生物合成途徑奠定了基礎(chǔ),也為商陸藥材品質(zhì)的形成提供理論依據(jù).

摘要： 轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)近年來廣泛應(yīng)用于各類動(dòng)植物基因挖掘,是研究基因表達(dá)的重要手段.轉(zhuǎn)錄組用于研究植物發(fā)育和抗逆等的報(bào)道較多,在小麥、水稻、玉米、甘薯等作物上有針對(duì)品質(zhì)基因挖掘的應(yīng)用.應(yīng)用RNA-seq技術(shù)對(duì)高淀粉馬鈴薯塊莖發(fā)育3個(gè)不同時(shí)期的基因表達(dá)情況進(jìn)行分析,探求塊莖發(fā)育期間影響碳水化合物代謝的關(guān)鍵基因及表達(dá)水平,篩選差異表達(dá)基因,為通過遺傳改良和優(yōu)化種植環(huán)境提升塊莖淀粉含量提供理論依據(jù).

摘要： 中國(guó)的馬鈴薯播種面積和總產(chǎn)均居世界第一,但單產(chǎn)水平還遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于發(fā)達(dá)國(guó)家.主要原因之一是,中國(guó)60％左右的馬鈴薯種植在干旱半干旱地區(qū),產(chǎn)量無法保障.馬鈴薯又屬于淺根系作物,對(duì)水分虧缺十分敏感,干旱會(huì)導(dǎo)致其減產(chǎn)甚至絕收.近幾年來,中國(guó)馬鈴薯各主產(chǎn)區(qū)受干旱影響大幅度減產(chǎn)的情況越來越頻繁.當(dāng)前,研究者在馬鈴薯抗旱方面的研究主要針對(duì)生理和形態(tài)指標(biāo),而有關(guān)馬鈴薯對(duì)干旱脅迫響應(yīng)的分子機(jī)制尚不清楚.隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)在基因表達(dá)和調(diào)控方面的應(yīng)用越來越廣泛.

摘要： 基于第二代轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),對(duì)采集自河南省新鄭市的粗柄羊肚菌(Morchella crassipes)M10菌株進(jìn)行了深度轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,分析了全轉(zhuǎn)錄組簡(jiǎn)單重復(fù)序列SSR(simple sequence repeat)分布和序列特征.結(jié)果表明:1)總計(jì)檢測(cè)到13044個(gè)SSR位點(diǎn),分布在8851條Trinity genes中,SSR在轉(zhuǎn)錄組序列中的平均密度為2067.77bp/個(gè),遠(yuǎn)高于其他真菌,其中2858條Trinity genes中包含超過1個(gè)SSR位點(diǎn),復(fù)合型SSR位點(diǎn)1925個(gè).2)單堿基重復(fù)基元最多,為8600個(gè),其中A/T重復(fù)類型遠(yuǎn)高于C/G重復(fù)類型,與多數(shù)大型真菌相同;其次是三堿基重復(fù)基元,為2497個(gè),其中ACC/GGT,AGC/CTG和AGG/CCT重復(fù)類型占60％以上,且明顯以GC的高頻概率出現(xiàn),在SSR分子標(biāo)記或其他重復(fù)序列多態(tài)性標(biāo)記的開發(fā)上,可優(yōu)選富含GC的SSR設(shè)計(jì)引物.

摘要： 紫薇是中國(guó)的傳統(tǒng)名花,在園林中具有廣闊應(yīng)用前景.目前已開發(fā)的紫薇SSR分子標(biāo)記較少,遠(yuǎn)不能滿足分子育種研究需要.利用MISA軟件對(duì)紫薇轉(zhuǎn)錄組測(cè)序得到的76405條unigenes序列進(jìn)行SSR位點(diǎn)搜索與分析,發(fā)現(xiàn)有13235個(gè)unigenes含有SSR位點(diǎn),發(fā)生概率為17.32％;共搜索到SSR位點(diǎn)16453個(gè),包含SSR的一致序列出現(xiàn)頻率為21.53％,SSR位點(diǎn)分布密度為1/5.60kb.二核苷酸和三核苷酸重復(fù)為最主要重復(fù)類型,分別占比49.40％和35.56％;重復(fù)基元中頻率最高的前兩種重復(fù)基元為AG/CT,占總SSR數(shù)量的42.28％.以二核苷酸重復(fù)序列設(shè)計(jì)100對(duì)SSR引物,并以紫薇回交群體的8個(gè)隨機(jī)子代基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增及多態(tài)性篩選,得到58對(duì)條帶清晰、特異性高的引物,其中36對(duì)具有多態(tài)性.上述結(jié)果表明,紫薇轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)可作為開發(fā)SSR標(biāo)記的可靠來源,研究結(jié)果可為紫薇屬植物分子育種研究奠定理論和技術(shù)基礎(chǔ).

摘要： 為了探究大黃魚高溫脅迫條件下基因表達(dá)水平的變化,本實(shí)驗(yàn)利用Illumina Hiseq2500的125pair-ended測(cè)序模式分別對(duì)大黃魚高溫處理組和常溫對(duì)照組進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組測(cè)序.對(duì)照組(3個(gè)生物學(xué)重復(fù))和高溫處理組(3個(gè)生物學(xué)重復(fù))分別獲得15.28Gb和13.92Gb測(cè)序數(shù)據(jù),GC含量平均值約為51％.過濾后的高質(zhì)量測(cè)序reads使用Bowtie2軟件比對(duì)到大黃魚參考轉(zhuǎn)錄組序列上估計(jì)基因表達(dá)量,進(jìn)而進(jìn)行基因表達(dá)差異統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn).以常溫對(duì)照組為參比,高溫處理組中閾值設(shè)為|log2(FC)|＞2和FDR＜0.05,共檢測(cè)到1259條顯著差異表達(dá)基因.其中,821條基因?yàn)楦弑磉_(dá),438條基因?yàn)榈捅磉_(dá).隨機(jī)選取12條差異表達(dá)基因,運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)進(jìn)行了驗(yàn)證,結(jié)果證實(shí)轉(zhuǎn)錄組分析可靠.進(jìn)一步將所有差異表達(dá)的基因進(jìn)行GO功能注釋和KEGG通路富集分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量差異表達(dá)基因的功能與氧化還原反應(yīng)、蛋白質(zhì)折疊和去折疊、糖和脂代謝以及某些疾病的發(fā)生相關(guān).該研究結(jié)果為下一步深入研究大黃魚高溫適應(yīng)的調(diào)控機(jī)制提供了重要的參考材料.

摘要： 小貫小綠葉蟬Empoasca onukii Matsuda是茶園中一種重要的同翅目害蟲,其成蟲通過刺吸式口器取食為害茶樹葉片,給茶葉生產(chǎn)帶來了嚴(yán)重威脅.由于該葉蟬的分子生物學(xué)背景較少,本研究利用了Illunima HiSeqTM2000/MiseqTM的高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)茶小貫小綠葉蟬成蟲進(jìn)行了大規(guī)模測(cè)序,共獲得了6.48G的Clean bases,經(jīng)轉(zhuǎn)錄組拼接后,獲得109084條unigene序列,拼接轉(zhuǎn)錄本的平均長(zhǎng)度(mean length)為944bp.根據(jù)Blast注釋分析后,初步篩選和發(fā)掘了若干條與小貫小綠葉蟬嗅覺可溶性蛋白全長(zhǎng)基因,包括10條氣味結(jié)合蛋白(Odorant-binding proteins,OBPs)和4條化學(xué)感受蛋白(Chemosensory proteins,CSPs).本研究為系統(tǒng)研究小貫小綠葉蟬的嗅覺生物學(xué)特征提供了理論基礎(chǔ)和積極意義.

摘要： 花色是決定花卉觀賞價(jià)值的重要指標(biāo),研究花色形成機(jī)理對(duì)生產(chǎn)和實(shí)踐有重要意義,牡丹花色豐富,是研究花色形成和著色的理想材料.本研究選用中原傳統(tǒng)催花品種'烏龍捧盛'顯蕾期和露色期花瓣為供試材料,采用二代高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)行雙端測(cè)序,共獲得有效數(shù)據(jù)146.38Mb,Q30在90％以上,使用Trinity組裝,得到顯蕾期和露色期Unigene分別為59604條和60658條,N50為1510bp和1514bp.將獲得Unigene進(jìn)行功能注釋和差異表達(dá)基因分析,結(jié)果表明:露色期相對(duì)顯蕾期差異表達(dá)基因12687個(gè),其中上調(diào)表達(dá)5482個(gè),下調(diào)表達(dá)7205個(gè).差異表達(dá)基因可歸納到43個(gè)GO功能組和133條KEGG代謝通路中.根據(jù)KEGG代謝通路和NR注釋結(jié)果,篩選出19個(gè)花色相關(guān)的差異表達(dá)基因,其中葉綠素合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因CHLM和POR在顯蕾期上調(diào)表達(dá),花色素合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因F3H、ANS、FLS和FNSII以及調(diào)節(jié)基因MYB在露色期上調(diào)表達(dá),這些基因可能導(dǎo)致了顯蕾期綠色花瓣逐步著色為露色期粉紅色花瓣.該研究首次對(duì)'烏龍捧盛'牡丹進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,豐富了牡丹轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)信息,揭示了牡丹花色形成和初步著色的分子機(jī)理,為后期牡丹花色形成機(jī)制研究奠定基礎(chǔ).

摘要： 本發(fā)明提供了一種同時(shí)對(duì)單細(xì)胞基因組和轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行高通量文庫構(gòu)建及測(cè)序的方法。本發(fā)明還提供了一種基于單細(xì)胞整合基因組學(xué)(SCIG)的測(cè)序方法及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的SCIG方案能夠?qū)崿F(xiàn)在單次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)得到一個(gè)單細(xì)胞的基因組和轉(zhuǎn)錄組，獲得單個(gè)細(xì)胞中遺傳和表觀遺傳信息，并進(jìn)行綜合分析，全方位，多層面的展示該細(xì)胞的狀態(tài)；這些優(yōu)勢(shì)使得SCIG在鑒定單細(xì)胞的特性和共性方面具有優(yōu)越性。

摘要： 本申請(qǐng)公開了一種單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和染色質(zhì)可及性雙組學(xué)單細(xì)胞測(cè)序文庫的構(gòu)建方法，其包括a)制備單細(xì)胞懸液；b)獲取染色質(zhì)開放位點(diǎn)，c)使用逆轉(zhuǎn)錄酶和逆轉(zhuǎn)錄引物對(duì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，以獲取單細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組信息；d)使用模板轉(zhuǎn)換寡聚物(TSO)進(jìn)行模板轉(zhuǎn)換反應(yīng)；e)后續(xù)編碼；f)初始文庫擴(kuò)增，和g)制備測(cè)序用染色質(zhì)開放位點(diǎn)文庫以及轉(zhuǎn)錄組文庫。本申請(qǐng)還公開了一種對(duì)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組和染色質(zhì)可及性雙組學(xué)測(cè)序文庫測(cè)序的方法，其包括將通過所述方法制備的染色質(zhì)開放位點(diǎn)文庫以及轉(zhuǎn)錄組文庫分別進(jìn)行測(cè)序。

摘要： 本發(fā)明提供了一種同時(shí)對(duì)單細(xì)胞基因組和轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行高通量文庫構(gòu)建及測(cè)序的方法。本發(fā)明還提供了一種基于單細(xì)胞整合基因組學(xué)(SCIG)的測(cè)序方法及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的SCIG方案能夠?qū)崿F(xiàn)在單次實(shí)驗(yàn)中同時(shí)得到一個(gè)單細(xì)胞的基因組和轉(zhuǎn)錄組，獲得單個(gè)細(xì)胞中遺傳和表觀遺傳信息，并進(jìn)行綜合分析，全方位，多層面的展示該細(xì)胞的狀態(tài)；這些優(yōu)勢(shì)使得SCIG在鑒定單細(xì)胞的特性和共性方面具有優(yōu)越性。

摘要： 本發(fā)明公開了一種適用于Sequel測(cè)序平臺(tái)的三代全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組分析方法，其特征在于，包括如下步驟：步驟一，測(cè)序數(shù)據(jù)過濾步驟；步驟二，測(cè)序數(shù)據(jù)比對(duì)步驟；步驟三，轉(zhuǎn)錄本注釋步驟；步驟四，ORF預(yù)測(cè)步驟；步驟五，轉(zhuǎn)錄本功能注釋步驟；步驟六，融合基因分析步驟；步驟七，LncRNA預(yù)測(cè)步驟；步驟八，可變剪切分析步驟；步驟九，可變多聚腺苷酸化分析步驟。本發(fā)明的運(yùn)行速度更快，且與常用的matchannot軟件相比對(duì)轉(zhuǎn)錄本的注釋更加精細(xì)，更加便于分析轉(zhuǎn)錄本的類型。

摘要： 本發(fā)明提供了一種基于第三代測(cè)序的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序方法，所述方法包括以下步驟：(1)采用逆轉(zhuǎn)錄引物對(duì)單細(xì)胞RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到帶有條形碼的cDNA；(2)對(duì)帶有條形碼的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將獲得的不同單細(xì)胞來源的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合；或?qū)⒉煌瑔渭?xì)胞來源的帶有條形碼的cDNA混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增；所述逆轉(zhuǎn)錄引物從5’端到3’端依次為錨定序列、條形碼序列和poly dT。本發(fā)明在逆轉(zhuǎn)錄引物中添加條形碼序列對(duì)單細(xì)胞全長(zhǎng)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，實(shí)現(xiàn)了對(duì)不同單細(xì)胞來源的序列進(jìn)行標(biāo)記，對(duì)不同來源的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物混合達(dá)到了第三代測(cè)序平臺(tái)對(duì)模板量的要求，利用第三代測(cè)序平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了對(duì)全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本的精確測(cè)序。

摘要： 本公開實(shí)施例公開了一種空間組學(xué)測(cè)序、單細(xì)胞表觀轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序及定位標(biāo)識(shí)方法，所述空間組學(xué)測(cè)序方法包括：預(yù)處理樣品切片；利用微流控芯片將交叉定位標(biāo)識(shí)添加至所述樣品切片，其中，所述交叉定位標(biāo)識(shí)為向微流控芯片的進(jìn)樣孔加入的包括不同barcode的物質(zhì)所確定的；依序?qū)λ鰳悠非衅M(jìn)行細(xì)胞裂解、擴(kuò)增及建庫后，根據(jù)所述交叉定位標(biāo)識(shí)進(jìn)行基因測(cè)序。上述測(cè)序方法利用微流控芯片加入標(biāo)記細(xì)胞位置的包括不同barcode的物質(zhì)，操作步驟簡(jiǎn)單，并且不限于空間轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、空間蛋白組測(cè)序、空間表觀組測(cè)序和空間表觀轉(zhuǎn)錄組測(cè)序等，應(yīng)用范圍廣。

摘要： 本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白組學(xué)測(cè)序數(shù)據(jù)的貫穿分析方法及系統(tǒng)，所述方法包括如下步驟：步驟S1，根據(jù)需求進(jìn)行樣本設(shè)計(jì)，獲取實(shí)驗(yàn)樣本；步驟S2，對(duì)實(shí)驗(yàn)樣本分別進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析以及蛋白組測(cè)序分析；步驟S3，將步驟S2獲得的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)和蛋白組測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行貫穿分析，通過本發(fā)明，可實(shí)現(xiàn)一種可以適用于任何生物體的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和蛋白組學(xué)測(cè)序數(shù)據(jù)的貫穿分析技術(shù)。

摘要： 本發(fā)明公開了一種高通量單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫的構(gòu)建方法和試劑盒以及測(cè)序方法，涉及基因測(cè)序技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用了在結(jié)合液滴微流控技術(shù)、拆分與組合技術(shù)以及高通量測(cè)序的技術(shù)上，創(chuàng)造性地采用特定標(biāo)簽的方法實(shí)現(xiàn)了同時(shí)對(duì)10～107個(gè)單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組的高通量測(cè)序分析，解決了大規(guī)模單細(xì)胞全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的技術(shù)難題，修改并完善了現(xiàn)有單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)，降低了測(cè)序的成本，提高了檢測(cè)的通量。

摘要： 本發(fā)明提供了一種基于第三代測(cè)序的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測(cè)序方法，所述方法包括以下步驟：(1)采用逆轉(zhuǎn)錄引物對(duì)單細(xì)胞RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，得到帶有條形碼的cDNA；(2)對(duì)帶有條形碼的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將獲得的不同單細(xì)胞來源的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物混合；或?qū)⒉煌瑔渭?xì)胞來源的帶有條形碼的cDNA混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增；所述逆轉(zhuǎn)錄引物從5’端到3’端依次為錨定序列、條形碼序列和poly dT。本發(fā)明在逆轉(zhuǎn)錄引物中添加條形碼序列對(duì)單細(xì)胞全長(zhǎng)RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，實(shí)現(xiàn)了對(duì)不同單細(xì)胞來源的序列進(jìn)行標(biāo)記，對(duì)不同來源的DNA擴(kuò)增產(chǎn)物混合達(dá)到了第三代測(cè)序平臺(tái)對(duì)模板量的要求，利用第三代測(cè)序平臺(tái)實(shí)現(xiàn)了對(duì)全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄本的精確測(cè)序。

摘要： 本發(fā)明公開了一種單條秀麗隱桿線蟲轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫的構(gòu)建方法及測(cè)序方法。測(cè)序文庫在構(gòu)建時(shí)第一步通過將單條秀麗隱桿線蟲在加入裂解液的情況下進(jìn)行研磨以使蟲體裂解完全。本發(fā)明方法為了克服實(shí)驗(yàn)操作性難題，通過改進(jìn)裂解液及裂解方法等相關(guān)裂解技術(shù)，改進(jìn)單細(xì)胞文庫構(gòu)建體系，成功攻克了單條線蟲裂解的技術(shù)難題，成功建立單條成年線蟲轉(zhuǎn)錄組測(cè)序文庫，并建立完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)流程，不僅為特殊處理線蟲提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持，也為稀有線蟲或特殊處理線蟲轉(zhuǎn)錄組方面的研究提供了關(guān)鍵的技術(shù)保障。