摘要:
2013年6月,某動物園兩只同窩馴養(yǎng)東北虎幼虎相繼死亡.剖檢尸體,均表現(xiàn)為雙側(cè)腎臟腫大,腦組織水腫.從內(nèi)臟中分離獲得2株革蘭氏陰性桿菌,經(jīng)細(xì)菌的形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、Phoenixl00細(xì)菌鑒定儀及分子生物學(xué)鑒定,確認(rèn)2株細(xì)菌是奇異變形桿菌,其rpoB基因序列與奇異變形桿菌標(biāo)準(zhǔn)參考株HI4320(AM942759)的同源性為gg.g%.經(jīng)Denis線特性檢測以及Rep/ERIC和PFGE分型分析,確認(rèn)從兩只幼虎中分離到的2株細(xì)菌為同一株奇異變形桿菌.該菌攜帶β-內(nèi)酰胺類耐藥基因CTX-M-9和奇異變形桿菌致病島ICEpml,具有較強(qiáng)的毒力和耐藥性,能致死小白鼠,死亡小鼠出現(xiàn)腦水腫病理變化.本試驗(yàn)是首次從患病虎內(nèi)臟中分離到奇異變形桿菌,為今后相關(guān)傳染病的病因分析診斷、流行病學(xué)調(diào)查、疾病防治等提供了參考依據(jù),也為奇異變形桿菌致病性等方面的研究提供了可借鑒的方向.rn 本次病例中,從兩只同窩東北虎幼虎中分別分離到奇異變形桿菌.首先對細(xì)菌進(jìn)行了生化和分子生物學(xué)鑒定,其中rpoB基因編碼細(xì)菌RNA聚合酶p亞基,rpo基因普遍存在于細(xì)菌染色體上,在長期進(jìn)化過程中具有高度保守性.當(dāng)16S rRNA不易區(qū)分親緣關(guān)系較近的菌種時,可利用rpo基因進(jìn)行區(qū)分.rn 本次試驗(yàn)用細(xì)菌表現(xiàn)型和分子生物學(xué)方法對兩株細(xì)菌進(jìn)行了同源性鑒定.Dienes檢測是專門用來鑒定奇異變形桿菌的遺傳差異的方法,其方法依賴于奇異變形桿菌在固體瓊脂平板上的遷移生長特性,當(dāng)兩株有遺傳差異的菌在遷移時,在遷移交匯處會相互抑制而出現(xiàn)肉眼可見的分界線,即Dienes線;反之,沒有遺傳差異的菌株在遷移交匯處會相互融合,不出現(xiàn)Dienes線.Rep/ERIC-PCR是根據(jù)所有細(xì)菌,包括不同種屬以及同種細(xì)菌的染色體上一段重復(fù)序列設(shè)計(jì)的PCR檢測方法,真細(xì)菌的基因組中分散存在DNA重復(fù)序列,主要包括基因外重復(fù)回文序列(Repetitive Extragenic Palindromic,REP)、腸桿菌基因間重復(fù)一致序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus.ERIC),它們在進(jìn)化過程中高度保守,因此在菌株、種、屬水平上都有明顯的分布差異.1996年,REP、ERIC-PCR作為一種細(xì)菌基因組指紋分析方法,被用于細(xì)菌基因組間的差異分析.由于不同菌株該重復(fù)序列的長度不同,因此可以作為一種用來鑒定兩株細(xì)菌同源性的方法,而PFGE方法是目前臨床常規(guī)的細(xì)菌溯源方法.通過以上方法的鑒定結(jié)果表明,兩株細(xì)菌為同一株奇異變形菌,并感染了同窩的兩只幼虎.rn 為了明確兩只幼虎的死因,同時進(jìn)行了部分病毒學(xué)檢測.死亡虎出現(xiàn)了腹瀉和腦水腫的病理癥狀,所以針對其腹瀉癥狀進(jìn)行了貓細(xì)小病毒、針對腦水腫癥狀進(jìn)行了A型流感病毒、狂犬病病毒和乙型腦炎檢測,結(jié)果均為陰性.雖然在兩只幼虎中分離獲得了同一株奇異變形桿菌且未檢測到部分可疑病毒,但是由于無法進(jìn)行回歸試驗(yàn)復(fù)制該病,該菌在本次病例中起到了重要作用.rn 通過此次分離鑒定工作,獲得了一株具有較強(qiáng)致病性和耐藥性,可使幼虎發(fā)生感染的奇異變形桿菌.由于奇異變形桿菌在環(huán)境中廣泛存在,感染該菌后動物內(nèi)臟器官受損、機(jī)體免疫力下降、病死率增加.因此,在日常飼養(yǎng)管理中要加強(qiáng)預(yù)防,嚴(yán)控飼料來源和水源,科學(xué)規(guī)劃飼養(yǎng)密度,嚴(yán)格執(zhí)行病健動物的隔離飼養(yǎng),減少繼發(fā)感染的機(jī)率.當(dāng)確定感染奇異變形桿菌后,可用氨基糖苷類和青霉素類藥物進(jìn)行治療.