摘要:
背景:胚胎干細胞由于其自我更新和多向分化特性在幫助理解細胞發(fā)育以及再生醫(yī)學、組織工程和細胞治療方面潛力巨大,為能更加深入理解和有效運用人胚胎干細胞,探索發(fā)現(xiàn)影響人胚胎干細胞增殖存活的潛在分子是十分必要的。巨噬細胞遷移抑制因子在人類多種細胞中表達,起初認為主要參與炎癥發(fā)生,但后來發(fā)現(xiàn)它在細胞增殖、分化、血管生成和腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用,但是人胚胎干細胞是否表達這種重要因子以及其在人胚胎干細胞中的功能仍不清楚。目的:明確人胚胎干細胞是否表達巨噬細胞遷移抑制因子及其相關受體,確定何種受體與巨噬細胞遷移抑制因子相互作用,初步探索巨噬細胞遷移抑制因子對人胚胎干細胞增殖存活的影響。方法:培養(yǎng)人胚胎干細胞,酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測細胞培養(yǎng)液中巨噬細胞遷移抑制因子水平,免疫熒光共聚焦顯微鏡觀察巨噬細胞遷移抑制因子在細胞中的分布定位情況,細胞免疫熒光、免疫印跡方法檢測胚胎干細胞中相關因子的表達;免疫熒光共聚焦顯微鏡、免疫共沉淀檢測巨噬細胞遷移抑制因子與其受體的結合情況。分組干預:分別以巨噬細胞遷移抑制因子抑制劑ISO-1(0,12,24,48,96,192μmol/L)干預處理人胚胎干細胞24 h,確定最佳抑制濃度,然后將不同質量濃度巨噬細胞遷移抑制因子(30,100,300μg/L)與最佳抑制濃度ISO-1共孵育24 h。CCK-8法檢測細胞增殖活性,TUNEL染色法檢測細胞凋亡水平。結果與結論:①巨噬細胞遷移抑制因子在人胚胎干細胞的胞質、胞膜、培養(yǎng)基中均有表達;②人胚胎干細胞表達巨噬細胞遷移抑制因子,主要表達其受體CXCR2和CXCR7;③巨噬細胞遷移抑制因子主要結合受體CXCR7;④巨噬細胞遷移抑制因子抑制劑ISO-1對細胞增殖存活的影響:與空白組相比,隨著ISO-1濃度增大,細胞間隙明顯增大,細胞活力逐漸降低(P<0.0001),TUNEL法檢測細胞凋亡率明顯增加(P<0.0001);⑤加入不同質量濃度的巨噬細胞遷移抑制因子(30,100,300μg/L)后,能減弱ISO-1(192μmol/L)誘導的細胞負相作用,細胞活性顯著提高(P<0.05),細胞凋亡率明顯降低(P<0.01);⑥結果表明,人胚胎干細胞表達分泌巨噬細胞遷移抑制因子這一重要因子,在胞質、胞膜、細胞外均可以檢測到,人胚胎干細胞主要表達巨噬細胞遷移抑制因子的受體CXCR2和CXCR7,而不是經(jīng)典受體CD74,在人胚胎干細胞上與巨噬細胞遷移抑制因子互作的蛋白受體是CXCR7,沒有發(fā)現(xiàn)與CXCR2相互作用的證據(jù),其作用還需進一步研究。另外,研究發(fā)現(xiàn)巨噬細胞遷移抑制因子對維持人胚胎干細胞的增殖存活發(fā)揮重要作用。