摘要:
目的研究低溫等離子體(NTAP)處理人牙齦上皮細(xì)胞(HGECs)后的生物學(xué)行為。方法將HGECs傳代培養(yǎng),待生長(zhǎng)活性最佳的第3~5代細(xì)胞,消化重懸后經(jīng)NTAP處理適當(dāng)時(shí)間(0,10,20,30,60 s)后,接種在鈦盤(pán)表面,加入口腔角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基(OKM),1%雙抗、5%CO_(2)和37°C孵箱條件下培養(yǎng)不同時(shí)間(4,12,24,48 h)貼壁生長(zhǎng),每組中各培養(yǎng)時(shí)間設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒-8(CCK-8)評(píng)估各組黏附細(xì)胞的數(shù)量;掃描電子顯微鏡(SEM)觀察各組細(xì)胞在鈦片表面的形態(tài);實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)各組細(xì)胞層粘連蛋白α3(Lamininα3)、整合素蛋白β4(Integrinβ4)和網(wǎng)蛋白(Plectin)黏附相關(guān)基因的表達(dá)情況以及Western blot觀察各組細(xì)胞黏附相關(guān)蛋白表達(dá)的變化情況。結(jié)果在0~20 s內(nèi),隨著NTAP作用時(shí)間的增加,細(xì)胞的黏附數(shù)量增加;但在20~60 s內(nèi),隨著作用時(shí)間的增加,細(xì)胞的黏附數(shù)量逐漸減少:證明NTAP處理時(shí)間為20 s時(shí)最有利于HGECs在鈦表面的黏附。CCK-8顯示:在設(shè)定的培養(yǎng)時(shí)間下(20 s),隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),對(duì)照組和NTAP組細(xì)胞在鈦表面的黏附數(shù)量增加。與對(duì)照組相比,在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)NTAP組細(xì)胞在鈦表面的黏附數(shù)量更多(P<0.05)。SEM顯示:NTAP組細(xì)胞在鈦表面更明顯地表現(xiàn)出不規(guī)則的多邊形、突起與偽足較多及更大的細(xì)胞擴(kuò)散面積。qRT-PCR顯示:NTAP組細(xì)胞在鈦表面的Lamininα3、Integrinβ4和Plectin黏附相關(guān)基因表達(dá)都高于對(duì)照組(P<0.05)。Western blot也證實(shí):NTAP組細(xì)胞在鈦表面上Lamininα3、Integrinβ4和Plectin黏附相關(guān)蛋白的表達(dá)均高于對(duì)照組。結(jié)論HGECs受NTAP處理后,結(jié)果表明20 s的作用時(shí)間能最大程度增加細(xì)胞在鈦表面的黏附數(shù)量和改變黏附形態(tài),同時(shí)能夠顯著上調(diào)Lamininα3、Integrinβ4和Plectin黏附相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),進(jìn)而能促進(jìn)HGECs對(duì)鈦表面的生物封閉作用。