摘要:
目的:本實驗通過建立單側(cè)輸尿管梗阻大鼠(UUO)模型,從組織和分子水平對Wnt11在梗阻性腎間質(zhì)纖維化中的表達(dá)部位及其與腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系進(jìn)行初步研究.方法:48只SPF級雄性Wistar大鼠(115-160克,4-6周),購自中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院實驗動物中心.隨機(jī)分為:模型組(UUO)和陰性對照組,模型組根據(jù)梗阻時間3d、5d、7d、14d、21d分為5組,每組8只.模型組(UUO組):行左側(cè)輸尿管結(jié)扎束制作梗阻性腎纖維化模型,10%水合氯醛(3ml/Kg)腹腔注射麻醉后右側(cè)臥位固定,于左側(cè)脅腹部觸及腎臟大體位置后豎直切口,暴露腎臟,沿左腎下極尋找并分離輸尿管,用4-0號手術(shù)線上下結(jié)扎后剪斷,分層縫合并關(guān)閉腹腔.對照組不予特殊處理.分別于術(shù)后3d,5d,7d,14d和21d10%水合氯醛(3ml/Kg)腹腔注射麻醉后,無菌條件下取左側(cè)腎組織,鹽水沖洗,紗布吸干表面水分,一部分置于4%多聚甲醛固定后待做腎臟病理形態(tài)學(xué)檢測和免疫組化,一部分置于-80°C冰箱中待行PCR基因檢測.結(jié)果:1.大體形態(tài)觀察:UUO組大鼠左側(cè)腎臟隨著梗阻時間延長體積逐漸增大,表面光滑度下降,顏色由深紅色逐漸變?yōu)樯n白,5d開始出現(xiàn)明顯的腎積水,隨時間延長積水亦增多明顯,腎皮質(zhì)逐漸變薄,皮髓質(zhì)界限不清,對照組為正常腎臟表現(xiàn).病理改變:HE染色隨著梗阻時間延長,腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤,腎小管萎縮,凹陷,囊狀改變.Masson染色可見梗阻后腎纖維化隨梗阻時間呈現(xiàn)逐步加重趨勢.2.Wnt11蛋白和mRNA在UUO大鼠腎臟中的表達(dá)情況:免疫組化觀察對照組Wnt11蛋白在腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)較少,可見于集合管胞漿內(nèi);UUO組術(shù)后3d在腎小管上皮細(xì)胞胞漿可見表達(dá),并隨時間延長表達(dá)明顯增加.Realtime PCR檢測Wnt11基因顯示其隨梗阻時間出現(xiàn)持續(xù)升高趨勢.結(jié)論:胚胎腎臟發(fā)育基因Wnt11在梗阻性腎病中出現(xiàn)表達(dá),且隨著梗阻時間的延長Wnt11表達(dá)更加明顯.Wnt11蛋白在梗阻性腎病中的腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)重新表達(dá),且隨梗阻時間延長表達(dá)逐漸增加.Wnt11表達(dá)與腎間質(zhì)纖維化程度呈正相關(guān),可能參與腎小管上皮轉(zhuǎn)分化的發(fā)生發(fā)展.