摘要： 背景:人參皂苷Rg3在腦缺血疾病中具有一定的神經(jīng)保護(hù)作用,但其對氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷的PC12細(xì)胞是否也有保護(hù)作用,目前尚不明確。目的:研究人參皂苷Rg3對氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷的PC12細(xì)胞是否有保護(hù)作用以及相關(guān)機(jī)制。方法:構(gòu)建高分化PC12細(xì)胞的氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷模型,采用MTT、乳酸脫氫酶、Calcein-AM/PI染色、Western blot、流式檢測氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷后對PC12細(xì)胞的影響,以及不同濃度人參皂苷Rg3處理PC12細(xì)胞后的保護(hù)作用,并且使用PI3K/AKT通路抑制劑LY294002和AKT激活劑SC79從PI3K/AKT信號通路研究其作用機(jī)制。結(jié)果與結(jié)論:①氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷模型能隨著缺糖缺氧時間的延長從而降低PC12細(xì)胞的存活率,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,上調(diào)p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白比值,促進(jìn)NLRP3炎性小體、腫瘤壞死因子α、白細(xì)胞介素1β、BAX蛋白的表達(dá),促進(jìn)乳酸脫氫酶的釋放;②人參皂苷Rg3在一定濃度范圍內(nèi)能提高氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷的PC12細(xì)胞存活率、減少乳酸脫氫酶的釋放,抑制細(xì)胞凋亡,降低p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT蛋白比值,下調(diào)NLRP3炎性小體、白細(xì)胞介素1β、腫瘤壞死因子α、BAX蛋白的表達(dá),還會降低活化的caspase-9蛋白表達(dá),促進(jìn)活化的caspase-3蛋白表達(dá);③LY294002對氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧損傷的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用與人參皂苷Rg3相當(dāng),而SC79可以減輕人參皂苷Rg3對PC12細(xì)胞的保護(hù)效果。因此,人參皂苷Rg3可以通過抑制PI3K/AKT信號通路,抑制PI3K和AKT的磷酸化,發(fā)揮抗炎、抗凋亡的作用,減輕氧糖剝奪/復(fù)糖復(fù)氧對PC12細(xì)胞造成的損傷。

摘要： 目的 通過氧糖剝奪(oxygen-glucose deprivation,OGD)體外模擬細(xì)胞缺血缺氧,觀察人牙髓細(xì)胞(hu-man dental pulp cells,hDPCs)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激變化,為缺血缺氧條件調(diào)控hDPCs的機(jī)制研究提供依據(jù).方法 應(yīng)用無糖DMEM培養(yǎng)液聯(lián)合低氧培養(yǎng)(體積分?jǐn)?shù)2％O2)構(gòu)建hDPCs OGD模型,體外模擬hDPCs缺血缺氧,設(shè)置對照組和實(shí)驗(yàn)組.對照組:常規(guī)培養(yǎng);實(shí)驗(yàn)組:OGD處理0、2、4、8 h.MTT檢測hDPCs OGD處理0、2、4、8 h后細(xì)胞存活率;qRT-PCR檢測hDPCs內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵分子:剪切X盒結(jié)合蛋白1(splicing x-box binding protein 1,sXBP1)、活化轉(zhuǎn)錄因子4(activating transcription factor 4,ATF4)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,chop)mRNA水平,Western blot檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白:磷酸化蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(phosphorylated RNA-activated protein kinase-like ER-resident kinase,p-perk)、磷酸化真核起始因子-2α(phosphorylated eukaryotic initia-tion factor-2α,p-eIF2α)表達(dá)水平.結(jié)果 相較于OGD處理0 h,OGD培養(yǎng)hDPCs 2、4、8 h后,死亡細(xì)胞增多,細(xì)胞存活率顯著下降(P<0.05).與對照組相比,OGD處理4 h后,hDPCs內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵信號分子sXBP1、ATF4、CHOP mRNA表達(dá)水平升高;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)鍵蛋白p-perk、p-eIF2α表達(dá)增加,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).結(jié)論 hDPCs OGD培養(yǎng)條件下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激水平明顯升高.

摘要： 目的探討多核糖核苷酸核苷轉(zhuǎn)移酶1(PNPT1)對氧糖剝奪(OGD)誘導(dǎo)心房肌細(xì)胞凋亡的影響和作用機(jī)制。方法體外培養(yǎng)HL-1心房肌細(xì)胞,PNPT1-siRNA轉(zhuǎn)染HL-1細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組為:正常組(Control)、OGD組、NC-siRNA組(轉(zhuǎn)染亂碼RNA)、PNPT1-siRNA組、OGD+NC-siRNA組和OGD+PNPT1-siRNA組。通過CCK-8檢測細(xì)胞存活率,qPCR檢測ACTB mRNA和TUBA mRNA的含量,Western blot檢測PNPT1蛋白水平,流式細(xì)胞術(shù)檢測HL-1細(xì)胞凋亡率,JC-1試劑盒檢測線粒體膜電位,透射電鏡觀察線粒體形態(tài)。結(jié)果隨OGD誘導(dǎo)時間延長,HL-1細(xì)胞質(zhì)中PNPT1的蛋白表達(dá)水平呈上升趨勢(P<0.05)。與NCsiRNA相比,PNPT1-siRNA明顯減少細(xì)胞內(nèi)PNPT1表達(dá)。OGD條件下,ACTB mRNA和TUBA mRNA降解增加(P<0.05),HL-1心房肌細(xì)胞凋亡率增加(P<0.05);相反地,PNPT1-siRNA則抑制ACTB mRNA和TUBA mRNA降解(P<0.05),同時降低HL-1心房肌細(xì)胞凋亡率(P<0.05),并且改善線粒體膜電位以及線粒體形態(tài)。結(jié)論抑制PNPT1可改善線粒體損傷并減少凋亡相關(guān)mRNA的降解,從而減輕OGD誘導(dǎo)的HL-1心房肌細(xì)胞凋亡損傷。

摘要： 目的:探討活血定眩膠囊(HXDX)對氧糖剝奪(OGD)誘導(dǎo)小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株bEnd.3鐵死亡的影響。方法:將bEnd.3細(xì)胞分為空白對照(control)組、OGD組、OGD+鐵死亡抑制劑ferrostatin-1(Fer-1)組及OGD+HXDX組,control組細(xì)胞正常培養(yǎng),其他組建立OGD模型,OGD+Fer-1組和OGD+HXDX組分別加入1μmol/L Fer-1和10%HXDX含藥血清后OGD處理6 h。FerroOrange探針測定細(xì)胞內(nèi)Fe^(2+)水平,DCFH-DA探針檢測活性氧(ROS)含量,試劑盒檢測超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)水平,Western blot檢測核因子E2相關(guān)因子2(Nrf2)、鐵蛋白重鏈1(FTH1)、谷胱甘肽過氧化物酶4(GPX4)、長鏈脂酰輔酶A合成酶4(ACSL4)、環(huán)加氧酶2(COX2)和NADPH氧化酶1(NOX1)蛋白表達(dá)。結(jié)果:與control組比較,OGD組bEnd.3細(xì)胞內(nèi)Fe^(2+)熒光強(qiáng)度與ROS含量顯著增加;SOD活性降低,GSH表達(dá)下降,MDA含量顯著增高(P<0.05);FTH1和GPX4表達(dá)降低,ACSL4、COX2和NOX1表達(dá)升高(P<0.05),Nrf2無顯著差異。HXDX含藥血清處理后,Fe^(2+)水平和ROS含量顯著降低(P<0.05);SOD活性和GSH含量顯著升高,MDA水平顯著降低(P<0.05);Nrf2、FTH1與GPX4蛋白的表達(dá)顯著增高(P<0.05),COX2和NOX1蛋白表達(dá)降低(P<0.05),ACSL4無顯著差異。結(jié)論:活血定眩膠囊可抑制體外OGD誘導(dǎo)的bEnd.3細(xì)胞鐵死亡,其機(jī)制與降低細(xì)胞內(nèi)Fe^(2+)和ROS含量、減輕脂質(zhì)過氧化及調(diào)控鐵死亡相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)。

摘要： 目的 觀察大鼠原代神經(jīng)元氧糖剝奪損傷后,腦泰方通過調(diào)節(jié)二價金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)體1(divalent metal transporter 1,DMT1)、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(transferrin receptor,TfR)、鐵調(diào)素(hepcidin,Hep)及膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ferroportin,FPN)表達(dá)變化,探討腦泰方對氧糖剝奪損傷神經(jīng)元保護(hù)機(jī)制。方法 將原代培養(yǎng)大鼠神經(jīng)元隨機(jī)分為對照(CG)組、氧糖剝奪模型(OGD)組、腦泰方干預(yù)氧糖剝奪模型(NTF)組。MTT法檢測各組神經(jīng)元細(xì)胞存活率;熒光探針檢測各組神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)二價鐵離子(Fe^(2+))、活性氧(reactive oxygen species,ROS)濃度;Western blot法檢測各組神經(jīng)元細(xì)胞Hep、DMT1、TfR、FPN蛋白表達(dá)。結(jié)果 與CG組比較,OGD組、NTF組神經(jīng)元細(xì)胞存活率均明顯降低(P<0.01);與OGD組比較,NTF組神經(jīng)元細(xì)胞存活率明顯升高(P<0.01)。與CG組比較,OGD組、NTF組神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Fe^(2+)、ROS濃度均明顯升高(P<0.01);與OGD組比較,NTF組神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Fe^(2+)、ROS濃度均顯著降低(P<0.01)。與CG組比較,OGD組、NTF組神經(jīng)元細(xì)胞Hep表達(dá)均明顯降低(P<0.01),DMT1、TfR、FPN表達(dá)均明顯升高(P<0.01);與OGD組比較,NTF組神經(jīng)元細(xì)胞Hep表達(dá)明顯升高(P<0.01),DMT1、TfR、FPN表達(dá)均明顯降低(P<0.01,P<0.05)。結(jié)論 腦泰方通過促進(jìn)神經(jīng)元細(xì)胞Hep的表達(dá),抑制神經(jīng)元細(xì)胞DMT1、TfR、FPN表達(dá),減少氧糖剝奪損傷后神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)Fe^(2+)及ROS聚積,起到保護(hù)神經(jīng)元,減輕氧糖剝奪損傷的作用。

摘要： 目的探討人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基對氧-糖剝奪后的海馬神經(jīng)干細(xì)胞的保護(hù)作用。方法建立將人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)成神經(jīng)干細(xì)胞的方法,檢測誘導(dǎo)后的神經(jīng)干細(xì)胞的生物學(xué)特性;收集誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞的條件培養(yǎng)基;原代培養(yǎng)小鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞并鑒定其神經(jīng)干細(xì)胞相關(guān)分子的表達(dá);建立原代海馬神經(jīng)干細(xì)胞氧-糖剝奪模型;采用EdU染色比較正常組(Normal組)、氧-糖剝奪組(OGD組)和氧-糖剝奪+條件培養(yǎng)基組(OGD+CM組)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力;采用免疫熒光染色法檢測不同組凋亡相關(guān)蛋白Cleaved-Caspase-3的表達(dá);采用Western blot法檢測不同組SOD蛋白的表達(dá);采用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同組ROS水平情況。結(jié)果熒光染色結(jié)果顯示,與Normal組相比,OGD組神經(jīng)干細(xì)胞EdU陽性細(xì)胞數(shù)減少,Cleaved-Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)目增加(P均<0.05);與OGD組相比,OGD+CM組神經(jīng)干細(xì)胞的EdU陽性細(xì)胞數(shù)增多,Cleaved-Caspase-3陽性細(xì)胞數(shù)目減少(P均<0.05)。Western blot結(jié)果顯示,與Normal組相比,OGD組SOD蛋白表達(dá)下降(P<0.05);與OGD組相比,OGD+CM組SOD蛋白表達(dá)升高(P<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,與Normal組相比,OGD組ROS表達(dá)升高(P<0.05);與OGD組相比,OGD+CM組ROS表達(dá)降低(P<0.05)。結(jié)論人胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)的神經(jīng)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基能夠提高氧-糖剝奪損傷的海馬神經(jīng)干細(xì)胞的增殖能力,減少細(xì)胞凋亡并促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的抗氧化能力恢復(fù)。

摘要： 目的探究干擾素-lambda(interferon-lambda,IFN-λ)對氧糖剝奪/復(fù)氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)誘導(dǎo)的血腦屏障(blood brain barrier,BBB)模型通透性的影響及機(jī)制。方法通過Transwell共培養(yǎng)模型,將b.End3細(xì)胞在Transwell的上腔室培養(yǎng),星形膠質(zhì)細(xì)胞在下腔室培養(yǎng),構(gòu)建BBB模型。將BBB模型分為對照組、OGD/R處理組、IFN-λ干預(yù)組,每組設(shè)3個復(fù)孔。OGD/R處理組給予OGD/R處理,IFN-λ干預(yù)組在給予OGD/R處理的基礎(chǔ)上給予IFN-λ干預(yù)。采用qRT-PCR檢測IFN-λ在OGD/R模型中是否發(fā)揮作用;通過qRT-PCR實(shí)驗(yàn)確定構(gòu)成Transwell共培養(yǎng)模型的星形膠質(zhì)細(xì)胞和腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(b.End3)能否表達(dá)IFN-λ的受體;根據(jù)Transwell滲透性實(shí)驗(yàn)FITC-dextran-10000滲透情況,評估IFN-λ處理后對OGD/R模型BBB通透性的影響;通過qRT-PCR、Western blot和熒光共聚焦實(shí)驗(yàn)檢測b.End3細(xì)胞緊密連接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5 mRNA及蛋白表達(dá)水平。結(jié)果qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,與對照組相比,OGD/R處理組星形膠質(zhì)細(xì)胞和b.End3細(xì)胞IFN-λ2和IFN-λ3表達(dá)增加(P0.05);Transwell滲透性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與OGD/R處理組相比,IFN-λ干預(yù)組FITC-dextran-10000滲透量明顯降低(P<0.05);qRT-PCR檢測結(jié)果顯示,與OGD/R處理組相比,IFN-λ干預(yù)組b.End3細(xì)胞緊密連接蛋白mRNA表達(dá)增加(P<0.05);Western blot檢測結(jié)果顯示,與OGD/R處理組相比,IFN-λ干預(yù)組b.End3細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá)增加(P<0.05);免疫熒光共聚焦檢測結(jié)果顯示,IFN-λ干預(yù)組b.End3細(xì)胞緊密連接蛋白平均熒光強(qiáng)度高于OGD/R處理組(P<0.05)。結(jié)論IFN-λ能夠促進(jìn)緊密蛋白表達(dá)和連接性,降低OGD/R誘導(dǎo)的BBB的通透性。

摘要： 目的:通過腸吸收液-體外藥理活性結(jié)合拆方研究蛭蛇通絡(luò)膠囊抗氧化和抗凝的主要組分。方法:根據(jù)制備工藝路線將蛭蛇通絡(luò)膠囊進(jìn)行拆方,得到全方和3個組分,分別制備相應(yīng)的腸吸收液。通過DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)觀察抗氧化作用,通過凝血四項(xiàng)和ADP誘導(dǎo)血小板凝集實(shí)驗(yàn)觀察抗凝作用。構(gòu)建氧糖剝奪SH-SY5Y細(xì)胞模型,驗(yàn)證蛭蛇通絡(luò)膠囊全方及拆方組分通過抑制氧化應(yīng)激發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果:蛭蛇通絡(luò)膠囊能清除DPPH自由基,最強(qiáng)的成分為含人參、黃芪、天麻、丹參和葛根的組分1;降低纖維蛋白原(FIB)水平、延長凝血酶時間(TT)并抑制ADP誘導(dǎo)的血小板凝集最強(qiáng)的成分為含水蛭、烏梢蛇和紅花的組分2。蛭蛇通絡(luò)膠囊全方和含人參、黃芪、天麻、丹參和葛根的組分1均能抑制氧糖剝奪SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶(LDH)釋放,升高超氧化物歧化酶(SOD)活性,降低丙二醛(MDA)水平,抑制神經(jīng)細(xì)胞損傷,提高細(xì)胞生存率。結(jié)論:通過制備工藝路線將蛭蛇通絡(luò)膠囊進(jìn)行快速拆解,尋找并定位全方中發(fā)揮抗氧化和抗凝的主要組分。結(jié)果證實(shí)蛭蛇通絡(luò)膠囊清除DPPH自由基,發(fā)揮抗氧化作用以含人參、黃芪、天麻、丹參和葛根的組分為最佳;抗凝血作用以含水蛭、烏梢蛇和紅花的組分最佳。本研究為中藥復(fù)方的功效物質(zhì)基礎(chǔ)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù),但其有效成分和具體機(jī)制仍需深入研究。

摘要： 目的探討miRNA-320對氧糖剝奪后P12細(xì)胞影響及機(jī)制.方法將P12細(xì)胞分為4組,正常對照組,模型組,miRNA-320擬似物組以及miRNA-320抑制劑組,氧糖剝奪4 h后,P12細(xì)胞恢復(fù)到正常氧糖環(huán)境中,24 h后收集細(xì)胞.采用MTT測定細(xì)胞增殖存活率,TUNEL檢測細(xì)胞凋亡qRT-PCR檢測miRNA-320、IGF-1 mRNA水平,WB測定IGF-1蛋白表達(dá)水平.結(jié)果與對照組比較,模型組細(xì)胞增殖力減弱、細(xì)胞凋亡增加(P<0.01)、miRNA-320表達(dá)上調(diào)(P<0.01),IGF-1 mRNA及IGF-1蛋白表達(dá)下降(P<0.01).與模型組比較,miRNA-320擬似物組細(xì)胞增殖顯著下降、細(xì)胞凋亡增加、miRNA-320表達(dá)上調(diào)、IGF-1 mRNA及IGF-1蛋白表達(dá)下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而抑制劑組與之相反.結(jié)論miRNA-320通過作用于IGF-1發(fā)揮其促凋亡、抗增殖作用.

摘要： 目的:通過OGD/R處理PC12細(xì)胞,證明NaAc在人類缺血性腦卒中中的作用和意義。方法:OGD模型的建立:用無氧糖培養(yǎng)液處理PC12細(xì)胞作為腦缺血再灌注損傷的體外模型;使用CCK-8比色法檢測OGD損傷后NaAc對PC12細(xì)胞的保護(hù)狀況;使用免疫印跡法Western blot檢測OGD損傷后的NaAc對PC12中ATF-6蛋白水平的影響。結(jié)果:OGD損傷后,補(bǔ)充濃度為6 mM的NaAc可增加PC12的存活率(n = 6, F = 70.10, P < 0.05);OGD損傷后,PC12中ATF-6的表達(dá)升高(t = 2.98, P < 0.05);向正常的PC12細(xì)胞補(bǔ)充NaAc后ATF-6表達(dá)降低(t = 3.11, P < 0.05);在損傷后的PC12細(xì)胞中添加濃度為6 mM的NaAc后,ATF-6的表達(dá)水平降低(n = 6, F = 2.09, P < 0.05)。結(jié)論:OGD損傷后,PC12中添加濃度為6 mM的NaAc是通過抑制ATF-6的表達(dá)來發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。

摘要： 目的：探討人參皇苷Rg1(Rg1)對PC12細(xì)胞氧糖剝奪后再復(fù)糖復(fù)氧(OGD/R)誘導(dǎo)的細(xì)胞自噬性損傷的作用及作用機(jī)制. 方法：以PC12細(xì)胞建立OGD/R自噬性損傷模型,觀察Rg1抗OGD/R后細(xì)胞自噬性損傷的作用,并從PI3KⅠ/Akt/m-TOR和PI3KⅢ/Becline-1/Bcl-2信號通路研究其作用機(jī)制. 結(jié)果：Rg1能增加OGD/R誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞存活、減少乳酸脫氫酶(LDH)漏出;同時抑制細(xì)胞自噬體的形成,降低胞漿LC3-Ⅱ陽性斑片的數(shù)量、下調(diào)LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值而上調(diào)p62蛋白表達(dá).機(jī)制研究結(jié)果表明,Rg1提高了PI3KⅠ、Akt、m-TOR蛋白磷酸化水平,對PI3KⅢ、Berline-1和Bcl-2蛋白表達(dá)沒有影響. 結(jié)論：在缺糖缺氧2h再復(fù)糖復(fù)氧24h,細(xì)胞出現(xiàn)過度噬和損傷,Rg1均能減輕OGD/R誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞自噬性損傷,其機(jī)制可能與激活PI3KⅠ/Akt/m-TOR信號通路有關(guān).

摘要： 目的：觀察氧糖剝奪/再灌注(OGD/OGD-R)誘導(dǎo)大鼠嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞PC12自噬和凋亡的發(fā)生及進(jìn)展.方法：PC12細(xì)胞經(jīng)氧糖剝奪及再灌注處理建立OGD/OGD-R模型,在處理不同時間點(diǎn),應(yīng)用GuavaNexin法檢測OGD組及OGD-R組細(xì)胞活性和凋亡率;WesternBlot法檢測自噬相關(guān)蛋白LC3II、Beclin1及凋亡相關(guān)蛋白Bax、aCaspase3表達(dá)變化;免疫熒光法觀察自噬小體;分別使用自噬上下游抑制劑(3-甲基腺嘌呤、E64d+pepstatinA)進(jìn)行調(diào)控,觀察自噬的波動;透射電子顯微鏡法直接觀察自噬相關(guān)超微結(jié)構(gòu)改變.結(jié)果及結(jié)論：OGD/OGD-R均能激活PC12細(xì)胞自噬和凋亡,可為進(jìn)一步探索腦缺氧/再灌注損傷病理生理過程中自噬與凋亡間潛在的串流奠定基礎(chǔ).

摘要： 目的：研究原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞對氧糖剝奪培養(yǎng)的增殖性應(yīng)答反應(yīng),探討建立良好模擬新生期缺氧缺血腦損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖的體外模型.方法：采用CCK-8(CellCounting Kit-8)法、EdU(Ethynyl deoxyuridine)摻入法和PCNA(Proliferating cellnuclearantigen)免疫組織化學(xué)染色法檢測原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞在氧糖剝奪(1％O2、無糖含血清培養(yǎng)基)培養(yǎng)不同時間(0、3、6、9小時)的增殖情況.結(jié)果：CCK-8檢測結(jié)果顯示隨氧糖剝奪培養(yǎng)時間延長原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞活力逐漸增強(qiáng),6小時達(dá)高峰,與相應(yīng)時間點(diǎn)正常培養(yǎng)的對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;隨后減弱,9小時已接近對照組水平.結(jié)論：氧糖剝奪(1％O2、無糖含血清培養(yǎng)基)培養(yǎng)6小時顯著的誘導(dǎo)了原代大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的增殖,成功模擬了體內(nèi)缺氧缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖改變,為進(jìn)行缺氧缺血性腦損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞過度增殖的相關(guān)研究提供了穩(wěn)定可靠的體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃屠碚撘罁?jù).

摘要： 缺氧缺血導(dǎo)致的鈣內(nèi)流致鈣超載是神經(jīng)元凋亡的重要途徑,AMPA受體在調(diào)控鈣內(nèi)流中發(fā)揮著重要作用,以GluR2亞基最為重要。銜接蛋白AP4可選擇性的介導(dǎo)AMPA受體的運(yùn)輸,AP4M1基因編碼的AP4蛋白的μ亞基的缺失可導(dǎo)致多種嚴(yán)重神經(jīng)功能障礙,該亞基與GluR2結(jié)合參與突觸可塑性的調(diào)控。本研究旨在探討氧糖剝奪(Oxygen glucose deprivation,OGD)對海馬神經(jīng)元內(nèi)AP4M1表達(dá)的影響,從而探尋神經(jīng)元損傷的機(jī)制。研究結(jié)果表明，AP4M1的mRNA及蛋白在氧糖剝奪的原代海馬神經(jīng)元中表達(dá)下調(diào)，可能是神經(jīng)元損傷過程中的重要途徑。

摘要： 目的:觀察血府逐瘀口服液干預(yù)氧糖剝奪(OGD)及SIRT1轉(zhuǎn)染H9c2大鼠心肌細(xì)胞模型,通過調(diào)節(jié)SIRT1觀察細(xì)胞活性的變化.rn 方法:將H9c2大鼠心肌細(xì)胞分為6組:正常組,OGD組,SIRT1轉(zhuǎn)染模型組,OGD+SIRT1轉(zhuǎn)染模型組,OGD+血府逐淤口服液給藥給藥組,OGD+SIRT1轉(zhuǎn)染模型+給藥組.采用CCK-8試劑盒繪制細(xì)胞生長曲線,進(jìn)行SIRT1細(xì)胞轉(zhuǎn)染并對分組進(jìn)行血府逐瘀口服液干預(yù),通過吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙重?zé)晒馊旧诠忡R下觀察細(xì)胞形態(tài);熒光定量PCR檢測SIRT1濃度與蛋白質(zhì)表達(dá)情況,得出結(jié)論.rn 結(jié)果:RT-PCR測得SIRT1在OGD組、SIRT1轉(zhuǎn)染組、OGD+SIRT1轉(zhuǎn)染組、OGD+給藥組與OGD+SIRT1轉(zhuǎn)染模型+給藥組中較正常組表達(dá)顯著降低.SIRT1在OGD+給藥組與正常組的表達(dá)差異是各組最小的,在OGD+SIRT1轉(zhuǎn)染模型+給藥組與正常組比較差異最為顯著.rn 結(jié)論:本研究結(jié)果證明了SIRT1在體外氧糖剝奪心肌細(xì)胞中的抗凋亡作用,揭示SIRT1可能是血府逐瘀口服液抗心肌細(xì)胞凋亡功能的作用靶點(diǎn)之一.

摘要： 目的：構(gòu)建PC12細(xì)胞OGD/OGD-R模型,觀察處理不同時間點(diǎn)自噬現(xiàn)象的發(fā)生及進(jìn)展.了解mTOR/p70S6K信號通路的激活狀態(tài)并探討其與Beclin 1介導(dǎo)參與的自噬信號通路間是否存在相關(guān)性;判斷PC12細(xì)胞凋亡與自噬時程聯(lián)系.探討進(jìn)一步藥物激活或抑制自噬后對PC12細(xì)胞的促存活/死亡的效應(yīng).方法：建立PC12細(xì)胞OGD/OGD-R模型,Western Blot法檢測自噬相關(guān)蛋白LC311、Beclin 1,凋亡相關(guān)蛋白Bax、aCaspase 3,mTOR(Ser2448)及其下游p70S6k(Thr389)磷酸化水平表達(dá);LC3ll Turnover實(shí)驗(yàn)評價自噬潮;免疫熒光、透射電鏡法觀察自噬體.Rapamycin、3-MA分別干預(yù)OGD/OGD-R損傷過程后CCK-8法檢測細(xì)胞活性,Guava Nexin法檢測細(xì)胞凋亡.結(jié)果:OGD/OGD-R處理均可引起PC12細(xì)胞損傷，OGD 3h時達(dá)到輕一中度的損傷并作為再灌注起始時間。自噬相關(guān)蛋白LC3II,Beclin1表達(dá)變化具有一定的時間規(guī)律性;LC3II免疫熒光顯示正常對照組只有極弱的熒光，OGD 3h時呈點(diǎn)狀聚集，R12h時進(jìn)一步增強(qiáng)并融合呈片狀;OGD 3h聯(lián)合3-MA抑制細(xì)胞自噬，LC3II表達(dá)減少且點(diǎn)狀聚集趨勢不明顯;E64d+pepstatin A阻斷自噬溶酶體降解導(dǎo)致LC3II的積聚;電鏡顯示OGD 3h,R12h,OGD 3h聯(lián)合E64d+pepstatin A處理組胞漿內(nèi)均出現(xiàn)明顯雙層膜自噬體結(jié)構(gòu)，而OGD3h聯(lián)合3-MA處理組自噬泡數(shù)量明顯減少;OGDlOGD-R處理均可上調(diào)各時間點(diǎn)自噬流量，其中OGD3-4h及再灌注晚期R12-24h是自噬的高活性期。結(jié)論:OGD/OGD-R均能激活PC12細(xì)胞自噬和凋亡。Beclin1和mTOR分別介導(dǎo)的自噬相關(guān)信號通路在不同應(yīng)激環(huán)境下具有潛在交互調(diào)控機(jī)制且自噬活性的變化與凋亡進(jìn)程具有相關(guān)性。調(diào)控自噬一溶酶體途徑在決定OGD/OGD-R損傷應(yīng)激中PC12細(xì)胞命運(yùn)具有雙重作用。

摘要： 目的 觀察鉀通道阻斷劑TEA對缺氧缺血損傷整體、離體模型的保護(hù)作用，闡明介導(dǎo)延遲整流鉀電流的電壓依賴性鉀通道Kv2.1在缺氧缺血細(xì)胞損傷中發(fā)揮的作用。方法 應(yīng)用大鼠tMCAO模型驗(yàn)證TEA對腦缺血損傷的保護(hù)作用；采用膜片鉗技術(shù)觀察氧糖剝奪（OGD）對Kv2.1-HEK293細(xì)胞膜電位以及TEA對OGDKv2.1-HEK293細(xì)胞鉀電流的影響。MTT法觀察OGD對Kv2.1-HEK293的損傷及TEA的保護(hù)作用。結(jié)果 TEA(5ug?kg-1)可以減小tMCAO大鼠的腦根死體積；與載體細(xì)胞株相比，Kv2.1-HEK293對OGD損傷的敏感性明顯提高；OGD可以降低Kv2.1-HEK293細(xì)胞膜電位；TEA(10mM)能在顯著降低OGDKv2.1-HEK293鉀電流密度的同時使其所受的細(xì)胞損傷降低。結(jié)論 鉀通道阻斷劑TEA對整體和離體缺氧缺血損傷模型發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用，并且這種保護(hù)作用同對Kv2.1的阻斷密切相關(guān)；提示Kv2.1是抗腦缺血藥物開發(fā)的潛在作用靶點(diǎn)。

摘要： 目的：觀察通絡(luò)救腦注射液對培養(yǎng)的正常及缺血腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的活性影響,揭示其通絡(luò)作用的效應(yīng)靶點(diǎn)與特征。方法 原代培養(yǎng)大鼠腦皮質(zhì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞,傳至第三代,分為正常及擬缺血組,采用培養(yǎng)基氧糖剝奪(OGD)法建立擬缺血模型。通過四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色分析法測定不同濃度的通絡(luò)救腦注射液對正常及OGD內(nèi)皮細(xì)胞的活性影響。結(jié)果 通絡(luò)救腦注射液作用于正常腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,與未加藥組比較,小劑量藥物抑制細(xì)胞活性,大劑量促進(jìn)細(xì)胞活性,劑量總趨勢呈反拋物線形;通絡(luò)救腦注射液作用于OGD組腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞,小劑量范圍促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖活性,呈顯著和極顯著差異,而大劑量組則抑制細(xì)胞活性,劑量總趨勢呈拋物線形。結(jié)論 通絡(luò)救腦注射液對正常及缺血腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有雙向調(diào)節(jié)作用,藥物劑量與細(xì)胞增殖活性呈非線性關(guān)系。大劑量與小劑量可能是不同的作用機(jī)制,反映了中藥復(fù)方藥效的多維性。

摘要： 本發(fā)明涉及一種氧糖雙抗的組合物及其應(yīng)用和氧糖雙抗的產(chǎn)品，屬于化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。研究發(fā)現(xiàn)抗壞血酸葡糖苷和α?熊果苷的組合物具有良好的抗氧化和美白保濕作用，抗壞血酸葡糖苷和α?熊果苷的組合物可抑制熒光性的AGEs生成且抑制率高達(dá)83.92±0.718％，具有良好的抗糖化作用，在制備氧糖雙抗的產(chǎn)品中具有極高的應(yīng)用前景。

摘要： 本發(fā)明提供了一種新型的糖硅氧烷共聚物，與某些以前已知的糖硅氧烷相比,所述糖硅氧烷共聚物在水存在的情況下具有改善的穩(wěn)定性。所述糖硅氧烷共聚物可用于個人護(hù)理組合物。

摘要： 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一個在海馬切片上氧-葡萄糖剝奪的體外缺血模型的建立。細(xì)胞死亡和腦損傷導(dǎo)致局部缺血的主要原因是由Ca

摘要： 本發(fā)明涉及一種氧糖雙抗的組合物及其應(yīng)用和氧糖雙抗的產(chǎn)品，屬于化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。研究發(fā)現(xiàn)抗壞血酸葡糖苷和α?熊果苷的組合物具有良好的抗氧化和美白保濕作用，抗壞血酸葡糖苷和α?熊果苷的組合物可抑制熒光性的AGEs生成且抑制率高達(dá)83.92±0.718％，具有良好的抗糖化作用，在制備氧糖雙抗的產(chǎn)品中具有極高的應(yīng)用前景。

摘要： 本發(fā)明提供了一種新型的糖硅氧烷共聚物，與某些以前已知的糖硅氧烷相比,所述糖硅氧烷共聚物在水存在的情況下具有改善的穩(wěn)定性。所述糖硅氧烷共聚物可用于個人護(hù)理組合物。

摘要： 本發(fā)明公開一種氧糖剝奪共PM2.5染毒模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用。采用自制的氧糖剝奪裝置對神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行氧糖剝奪造模，其次用不同劑量的PM2.5對氧糖剝奪的細(xì)胞進(jìn)行染毒建立氧糖剝奪共PM2.5染毒模型，用于評估外源污染物暴露對缺氧缺糖損傷的神經(jīng)細(xì)胞毒性的影響，從而反應(yīng)對缺血性腦卒中的影響。本發(fā)明體外模型操作簡便、建模成功率高，所需樣本量小，基于酶標(biāo)儀的數(shù)據(jù)獲得方便快速，具有重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。

摘要： 本發(fā)明公開了一種衰老SH?SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪再灌注模型及其構(gòu)建方法和應(yīng)用，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。該構(gòu)建方法包括以下步驟：(1)利用D?半乳糖使SH?SY5Y細(xì)胞致衰老，構(gòu)建得到衰老SH?SY5Y細(xì)胞；(2)所述衰老SH?SY5Y細(xì)胞先經(jīng)過缺糖缺氧處理，再經(jīng)復(fù)氧處理，得到所述衰老SH?SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪再灌注模型。本發(fā)明成功構(gòu)建了SH?SY5Y細(xì)胞氧糖剝奪再灌注模型，該模型可以模擬老齡腦缺血缺氧損傷過程的病理生理過程，為后續(xù)研究藥物的神經(jīng)保護(hù)作用奠定了基礎(chǔ)。

摘要： 本發(fā)明公開了西青果多酚提取物在制備降低氧糖剝奪/復(fù)氧誘導(dǎo)損傷藥物中的應(yīng)用，其中所述西青果多酚提取物為西青果多酚乙酸乙酯提取物(TPE)和/或西青果多酚正丁醇提取物(TPB)。本發(fā)明對西青果多酚提取物TPE和TPB的具體應(yīng)用進(jìn)行了研究，并首次發(fā)現(xiàn)TPE和TPB可保護(hù)BV2細(xì)胞免受氧糖剝奪/復(fù)氧模型(OGD/R模型)誘導(dǎo)的損傷，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)TPE和TPB是通過減少OGD/R模型中細(xì)胞的早期凋亡、維持細(xì)胞的線粒體膜電位和調(diào)控氧化應(yīng)激相關(guān)酶活，達(dá)到抵抗OGD/R誘導(dǎo)的損傷，因此可將西青果多酚提取物TPE和TPB用于制備由OGD/R誘導(dǎo)的疾病如缺血性腦中風(fēng)藥物，達(dá)到有效預(yù)防和治療缺血性腦中風(fēng)和修復(fù)腦損傷的目的。

摘要： 本發(fā)明公開了一種離體氧糖剝奪模型的建立方法，包括以下步驟：S1：首先設(shè)置雌雄小鼠進(jìn)行配對，在雌雄小鼠交配成功后，再將雌雄小鼠進(jìn)行分離；S2：在雌性小鼠懷孕13?15天時，雌性小鼠在用多聚賴氨酸涂層培養(yǎng)板上進(jìn)行過夜；S3：在用多聚賴氨酸涂層培養(yǎng)板上11?13h后，移除多聚賴氨酸，然后雌性小鼠在應(yīng)用層粘連蛋白涂層培養(yǎng)板上；S4：雌性小鼠在應(yīng)用層粘連蛋白涂層培養(yǎng)板2?4h后，移除層粘連蛋白后，用消毒蒸餾水對培養(yǎng)板進(jìn)行沖洗。本發(fā)明能夠精確，快速，有效地模擬細(xì)胞應(yīng)激，細(xì)胞自噬及腦缺血缺氧休克等病理狀態(tài)，且小鼠原代大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞十分容易達(dá)到氧耗竭的目標(biāo)。

摘要： 本實(shí)用新型提供了一種細(xì)胞氧糖剝奪造模實(shí)驗(yàn)儀器，包括：盒體，所述盒體的一端設(shè)置有氣門芯，所述盒體的另一端開設(shè)有兩個通氣孔，所述通氣孔活動地穿設(shè)有橡膠管；盒蓋，所述盒蓋活動地安裝在所述盒體上，所述盒蓋的內(nèi)沿設(shè)置有橡膠密封條，所述橡膠密封條設(shè)置在所述盒蓋與所述盒體頂端的結(jié)合處；氧氣探測儀，所述氧氣探測儀設(shè)置在所述盒體的內(nèi)部。本實(shí)用新型具備氧氣監(jiān)測功能，儀器整體采用透明亞力克板制成操作人員能夠?qū)崟r監(jiān)測盒內(nèi)細(xì)胞以及氧氣情況，儀器結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)合理，安裝拆卸快捷、運(yùn)輸方便。