摘要:
目的:研究達(dá)原飲治療新型冠狀病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19,簡稱新冠肺炎)的配伍內(nèi)涵,并驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測的作用機(jī)制。方法:運(yùn)用相關(guān)數(shù)據(jù)庫資源,在獲取達(dá)原飲代表性化學(xué)成分后,利用反向分子對接技術(shù)篩選得到關(guān)鍵性作用靶點(diǎn),并構(gòu)建各拆方組和全方組的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)、化合物-靶點(diǎn)-通路網(wǎng)絡(luò)。通過腹腔注射脂多糖建立急性肺炎大鼠模型,隨機(jī)分為正常組、模型組、破結(jié)逐邪組、清熱滋陰組、甘草組和全方組,除空白組外,其余5組大鼠分別腹腔注射5 mg·kg^(-1)脂多糖溶液,建立急性肺炎模型,正常組和模型組按10 mL·kg^(-1)灌胃生理鹽水,其余4組分別灌胃給藥達(dá)原飲提取液2 mL,連續(xù)3 d。于末次給藥2 h后,分離大鼠淋巴細(xì)胞,采用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測脾淋巴細(xì)胞中白細(xì)胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α含量,蛋白免疫印跡法(western blot,WB)檢測磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3-K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)蛋白及其磷酸化蛋白表達(dá)。結(jié)果:25個化合物主要作用于156個相關(guān)靶點(diǎn)和30條相關(guān)潛在通路,通過代謝途徑、PI3K-Akt、IL-17、低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)等信號通路協(xié)同發(fā)揮調(diào)節(jié)代謝、抗炎和增強(qiáng)機(jī)體免疫等作用。與空白組比較,模型組大鼠IL-2、TNF-α含量顯著增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);與模型組比較,破結(jié)逐邪組、清熱滋陰組、甘草組和全方組大鼠IL-2含量顯著降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);破結(jié)逐邪組、清熱滋陰組、甘草組IL-2、TNF-α水平與全方組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與正常組比較,模型組大鼠PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)均顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與模型組比較,全方組、清熱滋陰組和破結(jié)逐邪組大鼠p-PI3K、p-Akt的表達(dá)均顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),甘草組僅顯著降低p-Akt含量,清熱滋陰組顯著降低PI3K蛋白表達(dá)水平,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。全方組PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)與破結(jié)逐邪組、清熱滋陰組、甘草組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:達(dá)原飲中各藥味通過協(xié)同配合,從炎癥因子IL-2、TNF和PI3K、Akt及其磷酸化蛋白表達(dá)方面起到治療COVID-19作用。