摘要： 目的:觀察補(bǔ)骨顆粒含藥血清對內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)的成管實驗及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達(dá)的影響,從而探討補(bǔ)骨顆粒對血管生成的影響機(jī)制。方法:取成年SD大鼠按照隨機(jī)對照表分為空白對照組和實驗組,空白對照組予生理鹽水2 ml/kg灌胃,實驗組予補(bǔ)骨顆粒水溶液3.08 g/kg灌胃,制備空白血清及補(bǔ)骨顆粒含藥血清。取10周齡的雄性SD大鼠四肢股骨,在體外分離培養(yǎng)大鼠EPCs,并進(jìn)行傳代培養(yǎng),應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測鑒定細(xì)胞表面抗原。收集傳代培養(yǎng)3代的EPCs,分為補(bǔ)骨顆粒含藥血清組及空白血清組,分別予以補(bǔ)骨顆粒含藥血清及空白血清干預(yù)。于體外基質(zhì)膠中培養(yǎng)EPCs并觀察其成管情況。同時應(yīng)用Elisa檢測方法檢測VEGF表達(dá)情況。采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。結(jié)果:骨髓中分離出的細(xì)胞培養(yǎng)14 d后使用流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示CD34^(+)細(xì)胞比例為70.03%,CD133^(+)細(xì)胞比例為67.99%,血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子受體2(VEGFR2^(+))細(xì)胞比例為63.96%。成管實驗顯示補(bǔ)骨顆粒含藥血清組于干預(yù)72 h后,細(xì)胞形態(tài)趨于典型,呈毛細(xì)血管腔樣結(jié)構(gòu);空白血清組未形成典型的毛細(xì)血管腔樣結(jié)構(gòu)。Elisa檢測結(jié)果顯示補(bǔ)骨顆粒含藥血清組在干預(yù)24、48 h時的VEGF表達(dá)量明顯高于空白血清組(t=3.069、2.939,P=0.037、0.042);但是在干預(yù)72 h時補(bǔ)骨顆粒含藥血清組與空白血清組VEGF表達(dá)量比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=2.541,P=0.064)。補(bǔ)骨顆粒含藥血清組在干預(yù)24、48、72 h時的VEGF表達(dá)量無明顯變化(F=0.684,P=0.523),而空白血清組在干預(yù)24、48、72 h時的VEGF表達(dá)量明顯升高(F=5.656,P=0.019)。結(jié)論:補(bǔ)骨顆粒含藥血清可以激活EPCs的活性,促進(jìn)VEGF表達(dá),從而增強(qiáng)EPCs的血管生成作用。

摘要： 目的探討益脈降脂湯大鼠含藥血清對THP-1源性泡沫細(xì)胞增殖活性和細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量的影響。方法采用THP-1細(xì)胞為泡沫細(xì)胞建模來源,使用佛波酯(PMA)誘導(dǎo)分化成巨噬細(xì)胞,采用80 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)建立泡沫細(xì)胞模型;將細(xì)胞分為巨噬細(xì)胞組、模型組、阿托伐他汀(西藥)組及益脈降脂湯(中藥)低、中、高劑量組,其中巨噬細(xì)胞組和模型組使用10%大鼠正?？瞻籽甯深A(yù),其余各組使用相應(yīng)含藥血清干預(yù),干預(yù)12、24、48 h后用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測各組細(xì)胞增殖活性,同時檢測各組含藥血清干預(yù)泡沫細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)總膽固醇(TC)含量;油紅O染色觀察各組細(xì)胞脂質(zhì)蓄積情況。結(jié)果巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)及泡沫細(xì)胞模型建立成功;MTT法檢測細(xì)胞增殖活性結(jié)果顯示,益脈降脂湯含藥血清干預(yù)12、24、48 h后,與巨噬細(xì)胞組相比,模型組OD值顯著減少(P<0.05);與模型組相比,西藥組與中藥各劑量組的OD值均顯著升高(P<0.05)。與巨噬細(xì)胞組相比,模型組干預(yù)不同時間點細(xì)胞內(nèi)TC含量顯著增高(P<0.05);與模型組相比,西藥組與中藥各劑量組細(xì)胞內(nèi)TC含量明顯降低(P<0.05);與模型組相比,西藥組及中藥各劑量組泡沫細(xì)胞的脂質(zhì)蓄積明顯減少(P<0.05)。結(jié)論益脈降脂湯含藥血清可能有提高泡沫細(xì)胞生存活性,減少泡沫細(xì)胞凋亡、改善泡沫細(xì)胞膽固醇蓄積的作用。

摘要： 目的觀察大鼠交泰丸含藥血清預(yù)處理對人腦膠質(zhì)細(xì)胞(HEB)氧化損傷的改善作用并探討其分子機(jī)制。方法SD大鼠隨機(jī)分為兩部分,分別通過肉桂及黃連水提物灌胃、同體積蒸餾水灌胃制備交泰丸含藥血清及空白血清,將DMEM培養(yǎng)基與血清配制成10%完全培養(yǎng)基。將HEB分為對照組、模型組及交泰丸組,對照組及模型組加入空白血清培養(yǎng)基、交泰丸組加入含藥血清培養(yǎng)基。培養(yǎng)24 h后,交泰丸組及模型組使用過氧化氫處理建立HEB氧化損傷模型,對照組使用等體積PBS處理。采用β-半乳糖苷酶染色法觀察各組細(xì)胞氧化損傷比例,CCK-8法觀察細(xì)胞活力,流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞凋亡率,活性氧熒光染色法觀察細(xì)胞氧化應(yīng)激水平,qRT-PCR法檢測細(xì)胞衰老相關(guān)基因沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)、趨化因子聯(lián)接因子1(CXCL1)、叉頭框轉(zhuǎn)錄因子O亞族1(FOXO1)、P16、白細(xì)胞介素1α(IL-1α)、胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)、IL-6 mRNA表達(dá)。結(jié)果細(xì)胞氧化損傷比例模型組>交泰丸組>對照組,細(xì)胞活力對照組>交泰丸組>模型組,細(xì)胞凋亡率模型組>交泰丸組>對照組(P均<0.05)。對照組細(xì)胞核膜邊界清晰,ROS熒光強(qiáng)度低;模型組細(xì)胞核膜發(fā)生部分裂解,ROS熒光強(qiáng)度增強(qiáng);交泰丸組細(xì)胞膜及核膜結(jié)構(gòu)較模型組更加完整,ROS熒光強(qiáng)度降低。與對照組比較,模型組SIRT1、FOXO1 mRNA表達(dá)下降,CXCL1 mRNA表達(dá)上升;與模型組比較,交泰丸組SIRT1、FOXO1 mRNA表達(dá)下降(P均<0.05),三組其他基因比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論大鼠交泰丸含藥血清預(yù)處理可抑制過氧化氫誘導(dǎo)的HEB氧化損傷,其機(jī)制可能與增強(qiáng)細(xì)胞活力、抗細(xì)胞凋亡、減少細(xì)胞氧化應(yīng)激水平以及抗炎癥有關(guān)。

摘要： 目的探討復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)增殖的影響及其機(jī)制。方法通過直接貼壁法體外分離、培養(yǎng)、純化大鼠BMSC,對其進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察,采用流式細(xì)胞儀對其表面標(biāo)志物進(jìn)行鑒定。復(fù)方扶芳藤合劑按3 mL/(kg?d)給予大鼠灌胃14 d后取含藥血清。將BMSC分為空白對照組、含藥血清組、Notch1小干擾核糖核酸(siRNA)組和Notch1 siRNA+含藥血清組,檢測各組BMSC的增殖率以及Notch1信號通路相關(guān)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白的相對表達(dá)量。結(jié)果鏡下觀察可見第1代BMSC呈長梭形,以平行排列生長為主或呈漩渦狀生長。第3代BMSC陽性表達(dá)CD90、CD44,而CD45呈陰性表達(dá)。與空白對照組比較,含藥血清組和Notch1 siRNA+含藥血清組BMSC的增殖率均升高,Notch1 siRNA組BMSC的增殖率下降(均為P<0.05);與Notch1 siRNA組比較,Notch1 siRNA+含藥血清組BMSC的增殖率升高(P<0.05)。與空白對照組比較,含藥血清組Hey1、Delta樣配體(DLL)1的mRNA和蛋白相對表達(dá)量均升高,Notch1 siRNA組和Notch1 siRNA+含藥血清組Hey1、DLL1的mRNA和蛋白相對表達(dá)量均下降,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.05);與Notch1 siRNA組比較,Notch1 siRNA+含藥血清組Hey1、DLL1的mRNA和蛋白相對表達(dá)量均升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均為P<0.05)。結(jié)論復(fù)方扶芳藤合劑含藥血清可促進(jìn)大鼠BMSC的增殖,其作用機(jī)制可能與Notch1信號通路激活有關(guān)。

摘要： 目的 觀察當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清對TNF-α誘導(dǎo)人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞(HFLS-RA)增殖的影響。方法 體外培養(yǎng)HFLS-RA細(xì)胞,采用TNF-α及不同濃度含藥血清對細(xì)胞的生長進(jìn)行干預(yù),通過MTT法檢測含藥血清對TNF-α誘導(dǎo)HFLS-RA增殖的影響,ELISA法檢測細(xì)胞上清液中IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β表達(dá),PCR檢測細(xì)胞中Foxp3、ROR-γt、STAT3 mRNA表達(dá),Western blot法檢測細(xì)胞中Foxp3、ROR-γt、STAT3蛋白表達(dá)。結(jié)果 與空白組比較,模型組HFLS-RA細(xì)胞增殖活力上升(P<0.01),IL-6、IL-17水平升高(P<0.01),TGF-β、IL-10水平降低(P<0.01),ROR-γt、STAT3 mRNA及蛋白表達(dá)升高(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表達(dá)降低(P<0.05,P<0.01);與模型組比較,當(dāng)歸補(bǔ)血湯高劑量組HFLS-RA細(xì)胞增殖活力受到抑制(P<0.01),IL-6、IL-17水平降低(P<0.01),TGF-β、IL-10水平升高(P<0.01),ROR-γt、STAT3 mRNA及蛋白表達(dá)降低(P<0.01),Foxp3 mRNA及蛋白表達(dá)升高(P<0.05,P<0.01)。結(jié)論 當(dāng)歸補(bǔ)血湯含藥血清具有抑制TNF-α誘導(dǎo)的HFLS-RA細(xì)胞增殖的作用,可能與其調(diào)控Th17/Treg平衡、抑制炎癥反應(yīng)相關(guān)。

摘要： 目的:研究加味陽和湯對破骨細(xì)胞活性的影響,并基于NF-κB信號通路探討其作用機(jī)制。方法:制備加味陽和湯含藥血清,用RAW264.7細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)破骨細(xì)胞,CCK8法篩選出實驗給藥濃度,干預(yù)破骨細(xì)胞,收集細(xì)胞培養(yǎng)上清,檢測并計算各組TRAP酶活力值,Western Blot法檢測破骨細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)IκB-α和細(xì)胞核p65蛋白表達(dá),計算各組蛋白灰度值,分析各組數(shù)值差異有無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:CCK8結(jié)果顯示5%、10%、20%濃度的加味陽和湯血清對RAW264.7細(xì)胞活性無明顯影響(P>0.05)。細(xì)胞上清TRAP酶活力值顯示:與誘導(dǎo)組比,加味陽和湯血清組酶活力值下降,20%濃度組下降更為顯著,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。WB結(jié)果顯示:與生理鹽水組比,誘導(dǎo)組細(xì)胞核p65蛋白表達(dá)量明顯增加;與誘導(dǎo)組比,含藥血清組p65蛋白表達(dá)量下降,且含藥血清濃度越高,p65蛋白表達(dá)量越低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);與生理鹽水組相比,誘導(dǎo)組細(xì)胞質(zhì)IκB-α蛋白表達(dá)量下降,與誘導(dǎo)組相比,含藥血清組IκB-α蛋白表達(dá)量增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論:加味陽和湯可以抑制破骨細(xì)胞的活性,降低破骨細(xì)胞分泌的抗酒石酸酸性磷酸酶活性,其作用可能與其抑制NF-κB信號通路有關(guān)。

摘要： 目的研究溫陽化濁通絡(luò)方含藥血清對維甲酸相關(guān)孤核受體(RORγt)表達(dá)及甲基化的影響,探討其調(diào)控輔助性T細(xì)胞17(Th17)增殖從而治療硬皮病的作用機(jī)制。方法分別灌胃Wistar大鼠15、30、60 g/(kg·d)溫陽化濁通絡(luò)方藥液后制備不同劑量的含藥血清,同時收集硬皮病患者外周血分選Th17細(xì)胞。以空白血清作為空白對照,甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱(DCA)作為陽性對照,用不同劑量含藥血清處理Th17細(xì)胞后,采用CCK-8法檢測Th17細(xì)胞的增殖,采用qRT-PCR法檢測細(xì)胞中RORγt、白細(xì)胞介素17(IL-17)mRNA的表達(dá),采用Western blot法檢測細(xì)胞中RORγt蛋白表達(dá),采用酶聯(lián)免疫吸附測定法檢測細(xì)胞上清液中IL-17蛋白表達(dá),采用甲基化特異性PCR法檢測細(xì)胞中RORγt基因啟動子甲基化水平,并采用雙熒光素酶法檢測細(xì)胞中RORγt基因啟動子的轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果與空白對照比較,各劑量溫陽化濁通絡(luò)方含藥血清和DCA均可抑制Th17細(xì)胞的增殖(P<0.05),降低RORγt、IL-17 mRNA及其蛋白的表達(dá)水平,提高RORγt基因啟動子甲基化水平,減弱RORγt基因啟動子轉(zhuǎn)錄活性;其中除含藥血清低劑量組Th17 mRNA表達(dá)水平和RORγt基因啟動子甲基化水平外,其余各組上述指標(biāo)差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論溫陽化濁通絡(luò)方可通過促進(jìn)RORγt基因甲基化,抑制RORγt表達(dá)及IL-17分泌,進(jìn)而抑制Th17細(xì)胞的增殖。

摘要： 目的 探究四君子湯含藥血清對IEC-6細(xì)胞增殖及Rho GTP酶(RhoA)、p21、細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶2(Cdk2)表達(dá)的影響。方法 分別制備大鼠空白血清及四君子湯含藥血清,MTT法檢測IEC-6細(xì)胞增殖,RT-qPCR法檢測p21、Cdk2 mRNA表達(dá),Western blot法檢測RhoA、p21、Cdk2及磷酸化Cdk2(p-Cdk2)蛋白表達(dá)。結(jié)果 與對照組比較,10%、20%四君子湯含藥血清可促進(jìn)給藥24 h后細(xì)胞增殖(P<0.01),提高RhoA蛋白表達(dá),Cdk2 mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05,P<0.01);各劑量四君子湯含藥血清可促進(jìn)給藥48、72 h后細(xì)胞增殖(P<0.01),降低p21 mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.01),升高p-Cdk2蛋白表達(dá)(P<0.05,P<0.01)。與DFMO組比較,各劑量四君子湯含藥血清可促進(jìn)給藥48 h后細(xì)胞增殖(P<0.01),提高RhoA及p-Cdk2蛋白表達(dá)(P<0.01);10%、20%四君子湯含藥血清可促進(jìn)給藥72 h后細(xì)胞增殖(P<0.01),降低p21 mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05,P<0.01),提高Cdk2 mRNA和蛋白表達(dá)(P<0.05,P<0.01)。結(jié)論 四君子湯含藥血清可促進(jìn)正常小腸上皮細(xì)胞增殖,其機(jī)制與影響多胺調(diào)控RhoA、p21、Cdk2表達(dá)有關(guān)。

摘要： 目的:基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測心律康寧方治療緩慢性心律失常的作用機(jī)制并初步進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)驗證。方法:通過中藥分子機(jī)制的生物信息學(xué)分析工具(Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine,BATMAN-TCM)、人類基因的綜合數(shù)據(jù)庫(GeneCards)、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)等數(shù)據(jù)庫分別對心律康寧方和BA進(jìn)行分析靶點預(yù)測,并將二者獲得的靶點基因取交集,獲取心律康寧方治療緩慢性心律失常(Bradyarrhythmia,BA)的靶點基因,通過蛋白互作分析,獲取核心靶點基因,通過基因本體論(The Gene Ontology,GO)和京都基因與基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,獲取關(guān)鍵基因和靶點通路;制備含有不同濃度的心律康寧含藥血清,利用Langendorff灌流系統(tǒng)急性分離單個大鼠的心肌細(xì)胞,加入含藥血清,初步驗證預(yù)測結(jié)果。結(jié)果:藥物靶點1591個,疾病靶點1886個,交集靶點467個,KEGG通路主要通過鈣信號通路、心肌中環(huán)磷酸腺苷(Cyclic Adenosine Monophosphate,cAMP)信號通路、絲裂原活化的蛋白激酶(Mitogen-activated Protein Kinase,MAPK)、神經(jīng)活性配體-受體相互作用傳導(dǎo),GO主要涉及分子功能、細(xì)胞成分、生物過程三方面。動物實驗驗證表明,與正常血清對照組相比,心律康寧低、中、高劑量含藥血清對靜息細(xì)胞胞漿Ca^(2+)平均熒光強(qiáng)度有顯著的增強(qiáng)作用(P<0.05),前后差值兩兩比較(P<0.05),有劑量依賴性。結(jié)論:網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測結(jié)果較為可靠,心律康寧能促進(jìn)心肌細(xì)胞自發(fā)的外鈣內(nèi)流,具有治療BA的潛在作用。

摘要： 目的:探討壯藥扶正方含藥血清對腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)與肺癌A549細(xì)胞共培養(yǎng)體系肺癌A549細(xì)胞增殖、遷移及侵襲等生物學(xué)行為影響及可能的作用機(jī)制。方法:采用氟波酯(PMA)聯(lián)合白細(xì)胞介素-4、白細(xì)胞介素-13誘導(dǎo)人急性白血病單核細(xì)胞株(THP-1)建立TAMs體外模型,實時定量PCR及酶聯(lián)免疫吸附試驗法分析含藥血清(低、中、高劑量組)及藥物處理后24、48、72 h對TAMs表型調(diào)節(jié);采用共培養(yǎng)體系,以肺癌A549細(xì)胞為研究對象,分別采用MTT法、實時細(xì)胞分析技術(shù)(RTCA)、Transwell法檢測不同條件下A549細(xì)胞增殖、遷移及侵襲情況。結(jié)果:壯藥扶正方含藥血清能顯著上調(diào)TMAs中M1型標(biāo)志物白細(xì)胞介素-12、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)水平,下調(diào)M2型標(biāo)志物白細(xì)胞介素-10、CD206表達(dá)水平;與空白對照組比較,共培養(yǎng)組A549細(xì)胞增殖明顯增加,細(xì)胞遷移及侵襲能力均明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);與共培養(yǎng)組比較,壯藥扶正方含藥血清低、中、高劑量組A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲作用受抑制,且呈劑量依賴性(P<0.05)。結(jié)論:壯藥扶正方含藥血清在共培養(yǎng)體系中能夠抑制肺癌A549細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲作用,機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境TAMs表型有關(guān)。

摘要： 目的:研究調(diào)腎祛斑顆粒(TSQBG)含藥人血清對長波紫外線(UVA)輻照后人皮人皮黑素細(xì)胞(MC)增殖的影響. 方法:含藥黃褐斑血清分8組:空白組、無藥組、低濃度TSQBG組、中濃度TSQBG組、高濃度TSQBG組、低濃度沙棘沖劑(SJG)組、中濃度SJG組、高濃度SJG組.采用細(xì)胞學(xué)和血清藥理學(xué)方法,觀察TSQBG含藥人血清對長波紫外線(UVA)照射后的體外原代培養(yǎng)的人皮黑素細(xì)胞(MC)的細(xì)胞增殖的影響. 結(jié)果:0.2J/cm2劑量UVA照射的增殖效果優(yōu)于各劑量組(P＜0.01).各濃度TSQBG組間比較,中、高濃度TSQBG組含藥血清對MC增殖的抑制作用均較低濃度組強(qiáng)(P＜0.01),高濃度TSQBG組含藥血清對MC增殖的抑制作用又較中濃度組強(qiáng)(P＜0.01).各濃度SJG組間比較,中、高濃度SJG組含藥血清對MC增殖的抑制作用均較低濃度組強(qiáng)(P＜0.01),高濃度SJG組含藥血清對MC增殖的抑制作用又較中濃度組強(qiáng)(P＜0.01);表明不同濃度TSQBG含藥人血清對UVA誘導(dǎo)的人皮MC的增殖均有抑制作用,且濃度越高抑制作用越強(qiáng),并隨作用時間的延長細(xì)胞增殖率不斷降低,呈現(xiàn)量效和時效關(guān)系. 結(jié)論：調(diào)腎祛斑顆粒能下調(diào)UVA誘導(dǎo)的人皮MC的細(xì)胞增殖率的上調(diào),這可能是調(diào)腎祛斑顆粒治療黃褐斑的重要作用機(jī)理之一.

摘要： 目的：觀察益腎膠囊含藥血清對高糖環(huán)境下小鼠腎小球足細(xì)胞自噬的影響. 方法：制備不同濃度益腎膠囊含藥血清,對體外培養(yǎng)的小鼠腎小球足細(xì)胞進(jìn)行分組干預(yù),細(xì)胞分為：正常組(NG)、高糖組(HG)、低濃度益腎膠囊含藥血清組(LY)、中濃度益腎膠囊含藥血清組(MY)、高濃度益腎膠囊含藥血清組(HY)、貝那普利含藥血清組(BP).Western Blot檢測自噬相關(guān)LC3蛋白及泛素結(jié)合蛋白p62(p62/SQSTMl)蛋白的表達(dá)變化.透射電鏡下觀察各組足細(xì)胞內(nèi)自噬體的變化. 結(jié)果：與NG組相比，HG組足細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3II表達(dá)減少，泛素結(jié)合蛋白p62(p62/SQSTMl)表達(dá)增多(p<0.05);與HG組相比，HY組足細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3II表達(dá)增多，泛素結(jié)合蛋白p62(p62/SQSTMl)表達(dá)減少(p<0.05)。透射電鏡提示，與HG組相比，HY組足細(xì)胞自噬體增多(p<0.05). 結(jié)論：高糖可導(dǎo)致足細(xì)胞自噬障礙，而益腎膠囊可通過改善其自噬障礙，進(jìn)而發(fā)揮足細(xì)胞保護(hù)的作用。

摘要： 目的:觀察降壓寶藍(lán)片含藥血清對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的成纖維細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化的影響. 方法:原代培養(yǎng)大鼠胸主動脈外膜成纖維細(xì)胞,分為空白對照組、模型對照組、降壓寶藍(lán)片含藥血清低、中、高濃度組(體積分?jǐn)?shù)為5％、10％、15％).用噻唑藍(lán)(MTT)法測定細(xì)胞增殖活性,羥脯氨酸法檢測膠原含量,酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growthfactor-β1,TGF-β1)含量,免疫組化法檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-Smooth muscle actin,α-SMA)表達(dá)情況. 結(jié)果:與模型組相比,降壓寶藍(lán)片含藥血清高濃度組細(xì)胞增殖、膠原、TGF-β1分泌、α-SMA表達(dá)顯著降低(P＜0.05或P＜0.01),中濃度組細(xì)胞增殖、TGF-β含量顯著降低(P＜0.05). 結(jié)論:降壓寶藍(lán)片含藥血清可抑制成纖維細(xì)胞增殖和表型轉(zhuǎn)化.

摘要： 目的：制備桂枝甘草湯及各組分含藥血清,觀察桂枝甘草湯及不同組分含藥血清對單個豚鼠心室肌細(xì)胞鈉離子通道電流及其動力學(xué)參數(shù)的影響. 方法：急性分離豚鼠心室肌細(xì)胞,細(xì)胞復(fù)鈣后隨機(jī)分為空白組、甘草組、桂枝組、甘草加桂枝組和桂枝甘草湯組,各組分別加入各含藥血清,實驗分為10％和15％兩個濃度組,加藥完成后細(xì)胞放于37°C,5％CO2的孵育箱中孵育24h后進(jìn)行膜片鉗實驗. 結(jié)果：各組與空白組比較均不同程度抑制Na+電流(n=8,P＜0.05),15％濃度炙甘草組、桂枝組和桂枝甘草湯組與空白組比較使INa激活時間延長(n=8,P＜0.05). 結(jié)論：桂枝甘草湯及各組分含藥血清對Na+通道有不同程度的抑制作用,與Ⅰ類抗心律失常藥物作用機(jī)制相同,這可能是桂枝甘草湯抗心律失常的作用機(jī)理.

摘要： 目的:探索葛根芩連湯含藥血清調(diào)節(jié)胰島素抵抗(IR)的HepG2(IR-HepG2)細(xì)胞糖耗量的代謝機(jī)制. 方法:將正常的HepG2細(xì)胞作為空白對照組,IR-HepG2細(xì)胞分為模型組,非諾貝特組,葛根芩連湯低、中、高劑量組,以葡萄糖消耗量為藥效指標(biāo),采用色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),對IR-HepG2細(xì)胞及給藥后的IR-HepG2細(xì)胞內(nèi)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析,經(jīng)過Mass Profiler Professional(MPP)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,得出生物標(biāo)志物,通過驗證之后,比較其劑量依賴關(guān)系. 結(jié)果:篩選出了7個生物標(biāo)記物,未鑒定出化合物名稱的有3個,其余4個化合物中有3個是存在劑量依賴性. 結(jié)論:葛根芩連湯含藥血清可能通過調(diào)節(jié)IR-HepG2細(xì)胞色氨酸,泛酸和腺嘌呤的量達(dá)到降低糖耗量的作用.

摘要： 目的：觀察加味獨活寄生合劑含藥血清對兔退變軟骨細(xì)胞Wnt/β-catenin信號通路的影響. 方法：①將體外培養(yǎng)的兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞按隨機(jī)數(shù)表分為6組：空白對照組,模型組,加味獨活寄生合劑含藥血清低、中、高劑量組及Wnt信號通路阻斷劑組,后五組予白介素-1β誘導(dǎo)為退變軟骨模型,然后予不同劑量的含藥血清及sFRP-3干預(yù).②采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞生長及周期情況,實時熒光定量PCR檢測Wnt/β-catenin mRNA的表達(dá). 結(jié)果：①流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：與空白對照組比較,模型組及加味獨活寄生合劑含藥血清低、中、高劑量組細(xì)胞生長情況明顯減慢.②實時熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示：與模型組相比,加味獨活寄生合劑含藥血清低、中、高劑量組β-catenin mRNA均有降低. 結(jié)論：加味獨活寄生合劑含藥血清對白介素-1β誘導(dǎo)為退變軟骨模型有一定的保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與調(diào)控Wnt信號通路有關(guān).

摘要： 目的:觀察消癌解毒方含藥血清對人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞中蛋白表達(dá)變化的影響.rn 方法:選擇人肝癌SMMC-7721細(xì)胞作為實驗對象,消癌解毒方含藥血清作用人肝癌SMMC-7721細(xì)胞24h后,采用TMT肽段標(biāo)記,質(zhì)譜鑒定分析,運用IPA軟件對結(jié)果進(jìn)行生物信息學(xué)分析,觀察用藥前后各組蛋白質(zhì)表達(dá)的差異,應(yīng)用Western blot法檢測Cytochrome C、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3蛋白的表達(dá).rn 結(jié)果:共鑒定出3 025個蛋白點,消癌解毒方各劑量組與模型組相比差異表達(dá)明顯的蛋白423個,其中消癌解毒方高劑量組負(fù)調(diào)控蛋白55個,正調(diào)控蛋白85個;消癌解毒方中劑量組負(fù)調(diào)控蛋白33個,正調(diào)控蛋白50個;消癌解毒方低劑量組負(fù)調(diào)控蛋白36個,正調(diào)控蛋白49個;順鉑組負(fù)調(diào)控蛋白38個,正調(diào)控蛋白77個.這些差異表達(dá)蛋白涉及脂質(zhì)代謝、凋亡、氧化應(yīng)激等方面.信號通路分析涉及Granzyme A Signaling、TR/RXR Activation等通路.Western blot結(jié)果顯示消癌解毒方處理人肝癌SMMC-7721細(xì)胞24h后可引起Cytochrome C蛋白被釋放,Cleaved-Caspase-3蛋白表達(dá)量上調(diào),Caspase-3蛋白表達(dá)量下調(diào).rn 結(jié)論:消癌解毒方作用于人肝癌SMMC-7721細(xì)胞有多靶點,多中心的調(diào)控作用,其中激活線粒體凋亡相關(guān)蛋白可能是其抑制腫瘤生長,誘導(dǎo)腫瘤凋亡的途徑之一.

摘要： 目的:觀察補(bǔ)中益氣湯含藥血清對轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)介導(dǎo)的人肺腺癌A549細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中波形蛋白(Vimentin)及谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶π(GST-π)表達(dá)的影響.rn 方法:制備不同濃度的補(bǔ)中益氣湯含藥血清作用于TGF-β1誘導(dǎo)的A549細(xì)胞,實驗分組為空白血清組,空白血清+TGF-β1組以及高、中、低劑量補(bǔ)中益氣湯含藥血清+TGF-β1組.采用免疫組化、Western blot和Real-time PCR法分別檢測Vimentin及GST-π的蛋白和mRNA變化.rn 結(jié)果:高、中、低劑量的補(bǔ)中益氣湯含藥血清均能使TGF-β1誘導(dǎo)的上皮間質(zhì)化的A549細(xì)胞中Vimentin和GST-π蛋白表達(dá)下降,mRNA表達(dá)水平降低,其中高、中劑量組與空白血清組比,差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05,P＜0.01).rn 結(jié)論:補(bǔ)中益氣湯含藥血清能抑制TGF-β1介導(dǎo)的A549細(xì)胞上皮間質(zhì)化中Vimentin及GST-霄的表達(dá),改善其耐藥性.

摘要： 目的：觀察蓬子菜含藥血清對H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷模型細(xì)胞增殖與凋亡的影響,從分子生物學(xué)水平闡明蓬子菜保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的部分機(jī)制.rn 方法：用不同濃度(0,2,5,10％)的蓬子菜含藥血清及通塞脈片含藥血清與體外培養(yǎng)的經(jīng)H2O2誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型共同孵育,以CCK-8法檢測細(xì)胞的增殖活性,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量.rn 結(jié)果：與對照組相比,蓬子菜含藥血清能夠明顯減輕H2O2對的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的增殖抑制作用,促進(jìn)HUVECs的增殖,并與濃度呈正相關(guān);能顯著降低細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量,減少H2O2誘導(dǎo)的HUVECs凋亡;且優(yōu)于正常血清組及通塞脈片血清組(P＜0.05).rn 結(jié)論：蓬子菜能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖,降低細(xì)胞內(nèi)活性氧的含量,減少細(xì)胞凋亡,從而阻止ASO的發(fā)生,達(dá)到預(yù)防和治療ASO的作用.

摘要： 目的:研究活血定眩膠囊含藥血清對抗缺氧致小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞bEnd.3損傷的作用.rn 方法:將30只大鼠隨機(jī)分為空白對照組1 5只、活血定眩膠囊組15只,采集2組大鼠血清.將bEnd.3細(xì)胞分為空白血清正常組、缺氧模型組、陽性對照組、低劑量、中劑量、高劑量活血定眩膠囊血清組,給藥后,bEnd.3細(xì)胞缺氧6h.顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期,按試劑盒方法檢測細(xì)胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)的含量.rn 結(jié)果:中劑量活血定眩膠囊組可顯著對抗缺氧造成的損傷,明顯改善bEnd.3細(xì)胞的形態(tài),使缺氧所致細(xì)胞凋亡數(shù)明顯減少,有效抑制缺氧誘導(dǎo)的bEnd.3細(xì)胞發(fā)生G1/S期阻滯,抑制MDA生成,增強(qiáng)SOD活性.rn 結(jié)論:活血定眩膠囊對缺氧所致bEnd.3細(xì)胞的損傷具有明顯的對抗作用,其機(jī)制與增強(qiáng)細(xì)胞抗氧化能力、抑制細(xì)胞凋亡有關(guān).

摘要： 本發(fā)明公開了一種用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的中藥含藥血清制備及鑒定方法。所述方法詳細(xì)闡述了如何制備中藥動物含藥血清和如何鑒定，該方法證實了實驗所取動物血清中含有中藥成分，解決了動物血清含有中藥成分的正確灌胃方法，動物何時取血血清中含有中藥成分且藥物濃度相對較高，對血清中的藥物如何鑒定等一系列問題，為體外細(xì)胞培養(yǎng)的中藥含藥血清的制備及相關(guān)中醫(yī)藥實驗研究提供可靠資料。

摘要： 本發(fā)明通過制備葛花解酲方含藥血清，觀察不同濃度的含藥血清對HepG2肝癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響以及觀察不同濃度的含藥血清對HepG2肝癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響，證實了葛花解酲方含藥血清能夠抑制HepG2肝癌細(xì)胞的增殖并促進(jìn)其凋亡等作用，為該方的臨床抗肝癌轉(zhuǎn)移應(yīng)用提供理論和數(shù)據(jù)支撐。

摘要： 本發(fā)明涉及一種南蛇藤提取物含藥血清對HBV和MIF作用的研究方法。該南蛇藤提取物含藥血清對HBV和MIF作用的研究方法按順序包括：南蛇藤提取物含藥血清的制備過程，人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、純化過程，乙肝病毒體外自然感染人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的過程，南蛇藤提取物含藥血清處理感染了HBV的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的過程，結(jié)果檢測過程，統(tǒng)計學(xué)分析過程。本發(fā)明明確南蛇藤素對人類乙型肝炎的藥用價值，為突破乙型肝炎奠定基礎(chǔ)。明確給藥后人BMSCs中HBsAg、HBeAg、HBcAg、MIF的量的變化趨勢、HBVcccDNA的表達(dá)水平及MIF基因表達(dá)情況，為下一步探究南蛇藤素的作用機(jī)制提供數(shù)據(jù)支持。

摘要： 本申請涉及一種采用Thermo UPLC?ITQ?Orbitrap高分辨質(zhì)譜分析姜黃含藥血清的方法。本申請采用Thermo UPLC?ITQ?Orbitrap高分辨質(zhì)譜分析手了姜黃含藥血清中的化學(xué)成分為下一步研究藥代動力學(xué)打下基礎(chǔ)。

摘要： 本申請涉及一種采用Thermo UPLC?ITQ?Orbitrap高分辨質(zhì)譜分析郁金水煎液含藥血清的方法。本申請采用Thermo UPLC?ITQ?Orbitrap高分辨質(zhì)譜分析手了郁金含藥血清中的化學(xué)成分為下一步研究藥代動力學(xué)打下基礎(chǔ)。

摘要： 本發(fā)明公開一種由川芎嗪制備的含藥血清及其制備方法和應(yīng)用，該川芎嗪制備的含藥血清為將川芎嗪對大鼠進(jìn)行灌胃后，采血得到。本發(fā)明制備的含藥血清可有效抑制MG?63骨肉瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡、抑制其轉(zhuǎn)移，其效果明顯優(yōu)于川芎嗪以及現(xiàn)有治療骨肉瘤的藥物；具有抑制骨肉瘤的良好效果，該川芎嗪制備的含藥血清制備的藥物在治療骨肉瘤時也具有顯著的效果；同時本發(fā)明的制備方法安全可控，并且便于操作、保管、貯存和運輸。

摘要： 本發(fā)明公開一種由川芎醇提物制備的含藥血清及其制備方法和應(yīng)用，該川芎醇提物制備的含藥血清為將川芎醇提物對大鼠進(jìn)行灌胃后，采血得到。本發(fā)明制備的含藥血清可有效抑制MG?63骨肉瘤細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡、抑制其轉(zhuǎn)移，其效果明顯優(yōu)于川芎提取物以及現(xiàn)有治療骨肉瘤的藥物；具有抑制骨肉瘤的良好效果，該川芎醇提物制備的含藥血清制備的藥物在治療骨肉瘤時也具有顯著的效果；同時本發(fā)明的制備方法安全可控，并且便于操作、保管、貯存和運輸。

摘要： 本發(fā)明公開一種由四神丸制備的含藥血清及其制備方法和應(yīng)用，該四神丸制備的含藥血清為將四神丸對大鼠進(jìn)行灌胃后，采血得到。本發(fā)明制備的含藥血清可有效抑制LS174T結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡、抑制其轉(zhuǎn)移，其效果明顯優(yōu)于四神丸以及現(xiàn)有治療結(jié)腸癌的藥物；具有抑制結(jié)腸癌的良好效果，該四神丸制備的含藥血清制備的藥物在治療結(jié)腸癌時也具有顯著的效果；同時本發(fā)明的制備方法安全可控，并且便于操作、保管、貯存和運輸。

摘要： 本發(fā)明公開一種由臟毒清制備的含藥血清及其制備方法和應(yīng)用，該臟毒清制備的含藥血清為將臟毒清對大鼠進(jìn)行灌胃后，采血得到。本發(fā)明制備的含藥血清可有效抑制LS174T結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡、抑制其轉(zhuǎn)移，其效果明顯優(yōu)于臟毒清以及現(xiàn)有治療結(jié)腸癌的藥物；具有抑制結(jié)腸癌的良好效果，該臟毒清制備的含藥血清制備的藥物在治療結(jié)腸癌時也具有顯著的效果；同時本發(fā)明的制備方法安全可控，并且便于操作、保管、貯存和運輸。

摘要： 本發(fā)明公開了固本抑瘤II號含藥血清誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞自噬的用途。所述的固本抑瘤II號含藥血清可用作自噬誘導(dǎo)物，應(yīng)用于抗腫瘤藥物的研發(fā)，開拓了固本抑瘤II號的新用途，為制備通過調(diào)控自噬抗腫瘤的藥物提供了新選擇。