摘要： 隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)水平的提高,人們對(duì)動(dòng)物性食品的需求量顯著擴(kuò)大,對(duì)其安全性的要求也越來越嚴(yán)格。因此,家畜疾病的科學(xué)防控就顯得尤為重要。目前,我國(guó)家畜疾病尤其是傳染病的防控效果并不理想,仍需要不斷開發(fā)和探索新的防控產(chǎn)品和防控策略。納米抗體是最小的功能性抗原結(jié)合片段,和傳統(tǒng)抗體相比,其具有分子量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性高、易于基因改造、抗原特異性好、組織穿透力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。納米抗體源于駱駝科動(dòng)物,作為一種新型抗體,在動(dòng)物疾病防治技術(shù)中的研究和應(yīng)用正逐步增加。本文重點(diǎn)綜述納米抗體在家畜傳染病中的應(yīng)用和研究進(jìn)展,并結(jié)合發(fā)展趨勢(shì)預(yù)測(cè)未來的研究重點(diǎn)。

摘要： 納米抗體來源于天然缺失輕鏈的重鏈抗體可變區(qū),是已知最小抗原結(jié)合單元。該研究構(gòu)建了抗黃曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))納米抗體的單價(jià)及多價(jià)串聯(lián)體,分別與綠色熒光蛋白(GFP)編碼片段融合并克隆至原核表達(dá)載體p ET30。以大腸桿菌BL21(DE3)作為表達(dá)宿主,通過異丙基-β-D硫代吡喃半乳糖苷誘導(dǎo),親和層析技術(shù)分別純化單、雙及三價(jià)抗AFB_(1)納米抗體與GFP的融合蛋白。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析結(jié)果表明三種融合蛋白均為可溶性表達(dá),表達(dá)量分別為6.0、7.5、4.0 mg/L。采用酶聯(lián)免疫吸附法和熒光掃描法對(duì)重組融合蛋白的抗原識(shí)別活性及熒光特性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果顯示,未融合蛋白、單價(jià)及雙價(jià)串聯(lián)重組蛋白的半抑制濃度(IC;)分別為12.10、14.10、2.19 ng/m L,表明單價(jià)重組蛋白的IC;值與未融合蛋白相似,而雙價(jià)重組蛋白的IC;值與之相比提高了5.5倍。當(dāng)濃度為0.7 mg/m L時(shí),兩種重組蛋白的熒光強(qiáng)度均可達(dá)3000以上,熒光強(qiáng)度與GFP相當(dāng),且二價(jià)重組蛋白表現(xiàn)出更高的熒光強(qiáng)度;三價(jià)串聯(lián)重組蛋白表現(xiàn)出與抗原的結(jié)合活性,但AFB_(1)的阻斷活性較差,且熒光強(qiáng)度僅為1700左右。該研究為后續(xù)建立基于熒光信號(hào)的免疫學(xué)檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ),同時(shí)也為優(yōu)化免疫學(xué)檢測(cè)中納米抗體親和活性提供了思路和借鑒。

摘要： 非洲豬瘟(African swine fever,ASF)是一種侵害豬的烈性傳染病,世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)規(guī)定其為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病。目前,在世界范圍內(nèi)仍無針對(duì)其的商品化疫苗和藥物,使得綜合防控面臨著嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。防控非洲豬瘟疫情只能依靠準(zhǔn)確的診斷和可靠的早期監(jiān)測(cè)技術(shù),因此,快速、準(zhǔn)確、靈敏、方便的檢測(cè)方法對(duì)于凈化和預(yù)防非洲豬瘟具有重要意義。納米抗體(Nanobody,Nb)是一種新型抗體,其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、分子量小,易于改造且具有強(qiáng)穩(wěn)定性、高特異性、高親和力、低免疫原性、能識(shí)別隱蔽表位、組織穿透力強(qiáng)以及易于制備等特點(diǎn),應(yīng)用前景廣泛,故備受關(guān)注。本文歸納總結(jié)了非洲豬瘟的檢測(cè)方法和技術(shù)手段,探討了納米抗體在非洲豬瘟診斷中的應(yīng)用現(xiàn)狀,并對(duì)其未來發(fā)展方向做出展望。

摘要： 微囊藻毒素(MC)作為肝毒性最強(qiáng)的藻毒素之一,在受污染的水體中時(shí)常檢出,嚴(yán)重威脅著人畜飲水安全,加強(qiáng)其檢測(cè)十分重要。在前期研究中,已成功構(gòu)建抗MC-LR噬菌體展示納米抗體文庫。本研究以MC-LR-OVA作為包被原,經(jīng)4輪固相淘篩,獲得納米抗體M110。該抗體可識(shí)別MC-LR,且具有良好的穩(wěn)定性。基于納米抗體M110建立了檢測(cè)MC-LR的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫分析法(ic-ELISA),檢測(cè)的半抑制濃度IC50值為3.55 ng/mL,檢測(cè)限0.65 ng/mL,線性范圍1.28~9.88 ng/mL。與UPLC-MS/MS方法檢測(cè)結(jié)果相關(guān)系數(shù)達(dá)0.998,提示本方法可用于水體中微囊藻毒素殘留的檢測(cè)。

摘要： 抗體藥物是一種可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。該研究從抗體藥物的結(jié)構(gòu)入手,對(duì)抗體藥物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)基本特點(diǎn)進(jìn)行綜述,并著重介紹了其不同于小分子藥物的獨(dú)特代謝特征,主要包括與靶點(diǎn)介導(dǎo)的藥物處置、新生兒Fc受體介導(dǎo)的循環(huán)再利用、糖基化修飾和電荷異質(zhì)性對(duì)清除速率的影響以及與抗藥物抗體相結(jié)合導(dǎo)致清除加快。最后總結(jié)了納米抗體、雙特異性抗體、抗體藥物偶聯(lián)物等新型抗體藥物的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)展。

摘要： 近日,復(fù)旦大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院應(yīng)天雷教授、吳艷玲副研究員課題組與復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院孫蕾研究員課題組合作,發(fā)現(xiàn)并篩選出一種抗新冠病毒的全人源納米抗體(可制成納米雙抗藥物)。該抗體可同時(shí)靶向病毒兩個(gè)部位,高效中和包括奧米克戎變異株在內(nèi)的各種流行變異株,并可作為霧化吸入制劑。

摘要： 納米抗體是由駱駝科動(dòng)物產(chǎn)生的一類天然缺失輕鏈的重鏈抗體可變區(qū)。相比較于傳統(tǒng)單克隆抗體和多克隆抗體,其具有體積小、熱穩(wěn)定性強(qiáng)、耐有機(jī)溶劑、折疊性可逆、易于表達(dá)、高親和力、可特異性識(shí)別獨(dú)特表位等天然優(yōu)勢(shì)。因此,納米抗體在生物和農(nóng)業(yè)等研究領(lǐng)域備受關(guān)注。本文綜述了納米抗體的結(jié)構(gòu)、生化特性以及在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測(cè)中的研究進(jìn)展,并對(duì)納米抗體在農(nóng)產(chǎn)品真菌毒素檢測(cè)方向的發(fā)展前景進(jìn)行了展望。

摘要： 納米抗體(nanobody,Nb)作為目前已知的能與目標(biāo)抗原結(jié)合的最小單位抗體,在生物醫(yī)藥、臨床研究等方面具有良好的應(yīng)用前景。根據(jù)大腸桿菌密碼子偏好性優(yōu)化合成嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2(severe acute respiratory syndrome-coronavirus 2,SARS-CoV-2)中和性納米抗體H11-D4基因,將其克隆到pET28a表達(dá)載體上后,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞Rosetta(DE3)進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過鎳柱純化、質(zhì)譜分析、Western Blot鑒定H11-D4的表達(dá)情況并使用中和試驗(yàn)驗(yàn)證其中和活性。研究結(jié)果顯示,納米抗體H11-D4可成功在大腸桿菌中表達(dá),最佳誘導(dǎo)條件為IPTG終濃度1.0 mmol·L^(-1),37°C誘導(dǎo)5 h。H11-D4抗體的分子量大小約為17.9 kD,與預(yù)測(cè)值相符。經(jīng)鎳柱純化后,產(chǎn)量為25.16 mg·L^(-1)。透析復(fù)性后利用TritonX-114快速有效地去除了內(nèi)毒素,中和試驗(yàn)成功驗(yàn)證了H11-D4的中和活性(IC50)為171.1 nmol·L^(-1),研究結(jié)果可為納米抗體的原核表達(dá)和新型冠狀病毒肺炎(corona virus disease 2019,COVID-19)的預(yù)防及治療提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)支撐。

摘要： 間皮素(Mesothelin)是一個(gè)潛力巨大的治療三陰乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)的CAR-T靶點(diǎn)。目前,在臨床試驗(yàn)中開發(fā)的Mesothelin CAR-T大多使用小鼠單克隆抗體SS1來源的scFv作為抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域,易引起體內(nèi)抗CAR的抗體產(chǎn)生,導(dǎo)致治療效果不甚理想,因此,亟需開發(fā)新的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域構(gòu)建CAR-T。該研究選擇了靶向Mesothelin的納米抗體VHH,其親和力與SS1scFv相似,基于scFv和VHH的序列,該文分別構(gòu)建了scFv CAR-T和VHH CAR-T細(xì)胞,并比較了兩種CAR-T對(duì)靶點(diǎn)陽性TNBC細(xì)胞系的體外殺傷效果。結(jié)果顯示,與臨床試驗(yàn)中常用的scFv CAR-T相比,VHH CAR-T對(duì)TNBC細(xì)胞系的體外殺傷能力更好,且可表達(dá)更高水平的CD107a和CD69。這是目前國(guó)內(nèi)外報(bào)道的第一個(gè)基于VHH序列構(gòu)建的Mesothelin CAR-T,為后續(xù)靶向Mesothelin CAR-T的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

摘要： 目的篩選獲取抗HER-2納米抗體序列,偶聯(lián)人IgG1 Fc片段,采用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組抗HER-2納米抗體并驗(yàn)證其生物學(xué)特征。方法基于天然噬菌體納米抗體展示庫,采用生物素-鏈霉親和素液相篩選法,以生物素化HER-2抗原為靶點(diǎn)經(jīng)三輪淘選,隨機(jī)挑取單克隆進(jìn)行ELISA鑒定并測(cè)序。獲得抗HER-2納米抗體序列,將其偶聯(lián)人IgG1 Fc片段,并將重組抗HER-2納米抗體序列克隆至原核表達(dá)載體pET-30a,轉(zhuǎn)化至表達(dá)菌Arctic Express,誘導(dǎo)重組抗HER-2納米抗體表達(dá)并純化,采用SPR、Western blot、細(xì)胞免疫熒光對(duì)純化后的重組抗HER-2納米抗體特征和功能進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果經(jīng)淘選獲得了一條抗HER-2納米抗體序列,與人IgG1 Fc片段偶聯(lián),成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體,并表達(dá)純化獲得的重組抗HER-2納米抗體;SPR顯示其親和力較好,Western blot表明其可與HER-2抗原結(jié)合,細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示其可與人乳腺癌細(xì)胞SKBR-3結(jié)合。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)獲得了親和力、特異性均良好且具有一定生物學(xué)功能的重組抗HER-2納米抗體,可為其后續(xù)臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

摘要： 本研究以抑制綿羊肌肉生長(zhǎng)抑制素(MSTN)的功能為出發(fā)點(diǎn),通過制備MSTN納米抗體,探究一條有效促進(jìn)動(dòng)物肌肉生長(zhǎng)的新途徑.利用MSTN抗原蛋白免疫駱駝構(gòu)建了抗MSTN基因表達(dá)產(chǎn)物的噬菌體文庫.綿羊MSTN的誘導(dǎo)表達(dá),確定ELISA包被抗原用量.利用IPTG在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)MSTN成熟肽蛋白并純化,通過ELISA和Western blot方法檢測(cè)抗原反應(yīng)原性,優(yōu)化親和淘選包被抗原蛋白的濃度.

摘要： 為獲得高表達(dá)且特異性針對(duì)牛病毒性腹瀉病毒E2主要抗原表位的納米抗體,構(gòu)建抗BVDV納米抗體基因文庫,并利用噬菌體展示技術(shù)從庫中篩選出特異結(jié)合BVDV-E2的納米抗體,為防治BVDV奠定基礎(chǔ). 本實(shí)驗(yàn)對(duì)已構(gòu)建的文庫庫容量進(jìn)行鑒定,采用菌液PCR對(duì)抗體文庫的重組率進(jìn)行檢測(cè)、多樣性分析.利用M13K07輔助噬菌體對(duì)基因文庫拯救得到噬菌體展示文庫,測(cè)定其滴度.

摘要： 傳統(tǒng)抗體類藥物有諸多優(yōu)勢(shì),在治療和診斷等方面發(fā)揮了相當(dāng)重要的作用.但是隨著實(shí)際應(yīng)用的需求,使其面臨多方面的新挑戰(zhàn),除了其開發(fā)周期長(zhǎng),生產(chǎn)成本高外,其自身分子良較大,不穩(wěn)定易降解,注射給藥成為唯一途徑,同時(shí)由于很多情況下需要抑制的藥靶或抗原是位于細(xì)胞內(nèi),這使傳統(tǒng)抗體難于自發(fā)實(shí)現(xiàn),多需要其他載體攜帶其進(jìn)入.單域抗體(single domain antibody,sdAb),又稱納米抗體(nanobody)或重鏈抗體(heavy chain antibody,hcAb),是從駱駝科動(dòng)物和鯊魚的血清中分離出的一種抗體,其單域抗體VH2分子量?jī)H為通常抗體的1/10,晶體結(jié)構(gòu)直徑2.5nm,因而稱之為納米抗體(Nb),它具有高穩(wěn)定性、甚至可口服吸收而不被降解,抗原結(jié)合高親合性和可主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)作為胞內(nèi)抗體等優(yōu)勢(shì),針對(duì)某些特定抗原研發(fā)小型化的基因工程抗體在基礎(chǔ)研究、開發(fā)新藥和疾病的診斷和治療上具有廣闊的應(yīng)用前景.

摘要： 駱駝科動(dòng)物體內(nèi)存在天然缺失輕鏈的重鏈抗體(HCAbs),克隆其可變區(qū)可得到結(jié)合抗原的最小功能性片段—納米抗體.納米抗體具有穩(wěn)定性高、免疫原性弱、滲透力強(qiáng)等獨(dú)特的生物學(xué)特性,從而引起了生物技術(shù)的研究及疾病治療領(lǐng)域的廣泛關(guān)注.癌胚抗原(CEA)是腫瘤的重要標(biāo)志物,抗癌胚抗原(CEA)單克隆抗體則在腫瘤的早期診斷和治療中意義重大.借于CEA在腫瘤中的重要性及駝源納米抗體的特性,制備CEA納米抗體,憑借其高靶向性而有望成為腫瘤診斷和治療的新方法.

摘要： 本項(xiàng)研究根據(jù)GenBank公布的BVDV-NADL株Erns(EO) ,E2基因的核苷酸序列，設(shè)計(jì)引物，采用PCR技術(shù)從pACNR/NADL質(zhì)粒中擴(kuò)增Erns,E2基因，構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pET-32a-Erns,pET-32a-E2，將其轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌BL21中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，用SDS-PAGE及Western blot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)情況及其反應(yīng)原性。將牛病毒性腹瀉病毒接種長(zhǎng)滿單層的MDBK細(xì)胞，接種72 h后，收取病毒液。將全病毒滅活，免疫雙峰駝。分離外周血淋巴細(xì)胞，并提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA。采用巢式PCR技術(shù)擴(kuò)增重鏈抗體可變區(qū)基因的核苷酸序列，構(gòu)建噬菌體展示載體，經(jīng)過多次連接轉(zhuǎn)化TG1感受態(tài)細(xì)胞，構(gòu)建初始文庫。利用M13K07輔助性噬菌體超感染構(gòu)建噬菌體展示anti-BVDV納米抗體文庫。研究結(jié)果表明成功構(gòu)建牛病毒性腹瀉病毒囊膜蛋白Erns,E2的原核表達(dá)載體，經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白分別為45KD,64KD左右，經(jīng)Ni-NTA蛋白純化儀純化蛋白，獲得純度較高的蛋白。Western blot試驗(yàn)表明目的蛋白具有很好的反應(yīng)原性。以cDNA為模板，擴(kuò)增駝源重鏈抗體可變區(qū)序列，構(gòu)建庫容量為4.32×105初始文庫，并經(jīng)過輔助噬菌體的超感染，成功構(gòu)建噬菌體展示納米抗體文庫，庫容量大小約為1.3×1011。為后續(xù)利用BVDV的囊膜蛋白Erns,E2作為抗原篩選具有高親和力、高特異性的抗BVDV的納米抗體奠定基礎(chǔ)。

摘要： 基于磁珠的免疫親和純化方法(magnetic-bead-based immunoaffinity extraction,M-IAE)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于復(fù)雜食品及飼料樣本中黃曲霉毒素B1的富集.然而,這種方法在應(yīng)用上有其自身的缺陷,包括免疫親和材料的富集能力差、重復(fù)使用性差等.本研究提出了一種改進(jìn)的M-IAE方法富集玉米樣本中的黃曲霉毒素B1。通過制備具有良好環(huán)境耐受性的納米抗體（anti-AFB1Nbs）替代傳統(tǒng)抗體，并且將前期合成的磁性聚丙烯羧酸分子刷（magnetic beadscarrying poly(acrylic acid)brushes，MB@PAA）作為“納米抗體集裝箱”以提高其載量，從而提高其富集黃曲霉毒素B1的能力。結(jié)果顯示：MB@PAA對(duì)納米抗體的負(fù)載量為623μg/mg，比相同尺寸的磁珠提高了19倍。同時(shí)，該MB@PAA@Nbs對(duì)黃曲霉毒素B1的飽和吸附量達(dá)到了0.23mg/g，比常規(guī)的MB@Nbs提高了35倍。此外，MB@PAA@Nbs在重復(fù)使用10次后仍然保持了80%以上的生物活性。綜上所述，本研究制備的MB@PAA@Nbs復(fù)合微球?qū)S曲霉毒素B1展現(xiàn)了極高的富集能力，同時(shí)為其它分析物的富集提供了一種新的思路。

摘要： 真菌毒素為真菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物,具有極強(qiáng)的毒性,對(duì)農(nóng)作物、植物及其副產(chǎn)品均有一定污染,嚴(yán)重威脅人類的健康,為了監(jiān)測(cè)和控制真菌毒素的污染,其快速檢測(cè)方法已成為近年來科學(xué)界研究的重點(diǎn).其中，免疫分析法具有靈敏度高、反應(yīng)速度快、操作簡(jiǎn)便、成本低廉、易于開發(fā)便攜式檢測(cè)儀器等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于真菌毒素的快速檢測(cè)。然而傳統(tǒng)免疫分析法中，不可避免使用到人工合成抗原，需要大量毒素標(biāo)準(zhǔn)物以及有機(jī)試劑，直接威脅操作人員身體健康?？躬?dú)特性抗體的應(yīng)用將會(huì)在很大程度上降低免疫分析法的成本，并減少對(duì)分析人員的健康危害。

摘要： 新型小分子Nanobody單體分子量過小、親和力較低.合適的Nanobody多聚體可能更適用于放射免疫顯像.本文用99mTc標(biāo)記EGFR Nanobody五聚體制備腫瘤靶向顯像劑,通過體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察標(biāo)記抗體與腫瘤細(xì)胞和移植瘤組織的結(jié)合特性,探討MmTc-EGFR Nanobody五聚體用于腫瘤放射免疫顯像的可行性.三羰基锝法標(biāo)記抗EGFR Nanobody單體和五聚體,超濾離心法純化后,放化純大于95％.在體外細(xì)胞水平,99mTc-EGFR Nanobody單體和五聚體均可以與EGFR表達(dá)陽性的A431細(xì)胞特異性結(jié)合;99mTc-EGFR Nanobody單體結(jié)合率高于99mTc-EGFR Nanobody五聚體[(11.32±2.73)％和(5.80±0.92)％,P＜0.05].體內(nèi)SPECT顯像,A431移植瘤小鼠尾靜脈注射99mTc-EGFR Nanobody五聚體后,腫瘤組織有較明顯的放射性分布,最大T/NT2.9(1.5h);注射99mTc-EGFR Nanobody單體后移植瘤僅見模糊軟組織影,最大T/NT1.2;OCM-1移植瘤小鼠尾靜脈注射兩種標(biāo)記抗體后,腫瘤組織未見明顯放射性濃聚.本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為99mTc-EGFR Nanobody五聚體優(yōu)于單體可用于腫瘤放射免疫顯像.

摘要： 新型小分子Nanobody單體分子量過小、親和力較低.合適的Nanobody多聚體可能更適用于放射免疫顯像.本文用99mTc標(biāo)記EGFR Nanobody五聚體制備腫瘤靶向顯像劑,通過體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察標(biāo)記抗體與腫瘤細(xì)胞和移植瘤組織的結(jié)合特性,探討MmTc-EGFR Nanobody五聚體用于腫瘤放射免疫顯像的可行性.三羰基锝法標(biāo)記抗EGFR Nanobody單體和五聚體,超濾離心法純化后,放化純大于95％.在體外細(xì)胞水平,99mTc-EGFR Nanobody單體和五聚體均可以與EGFR表達(dá)陽性的A431細(xì)胞特異性結(jié)合;99mTc-EGFR Nanobody單體結(jié)合率高于99mTc-EGFR Nanobody五聚體[(11.32±2.73)％和(5.80±0.92)％,P＜0.05].體內(nèi)SPECT顯像,A431移植瘤小鼠尾靜脈注射99mTc-EGFR Nanobody五聚體后,腫瘤組織有較明顯的放射性分布,最大T/NT2.9(1.5h);注射99mTc-EGFR Nanobody單體后移植瘤僅見模糊軟組織影,最大T/NT1.2;OCM-1移植瘤小鼠尾靜脈注射兩種標(biāo)記抗體后,腫瘤組織未見明顯放射性濃聚.本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為99mTc-EGFR Nanobody五聚體優(yōu)于單體可用于腫瘤放射免疫顯像.

摘要： 新型小分子Nanobody單體分子量過小、親和力較低.合適的Nanobody多聚體可能更適用于放射免疫顯像.本文用99mTc標(biāo)記EGFR Nanobody五聚體制備腫瘤靶向顯像劑,通過體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn)觀察標(biāo)記抗體與腫瘤細(xì)胞和移植瘤組織的結(jié)合特性,探討MmTc-EGFR Nanobody五聚體用于腫瘤放射免疫顯像的可行性.三羰基锝法標(biāo)記抗EGFR Nanobody單體和五聚體,超濾離心法純化后,放化純大于95％.在體外細(xì)胞水平,99mTc-EGFR Nanobody單體和五聚體均可以與EGFR表達(dá)陽性的A431細(xì)胞特異性結(jié)合;99mTc-EGFR Nanobody單體結(jié)合率高于99mTc-EGFR Nanobody五聚體[(11.32±2.73)％和(5.80±0.92)％,P＜0.05].體內(nèi)SPECT顯像,A431移植瘤小鼠尾靜脈注射99mTc-EGFR Nanobody五聚體后,腫瘤組織有較明顯的放射性分布,最大T/NT2.9(1.5h);注射99mTc-EGFR Nanobody單體后移植瘤僅見模糊軟組織影,最大T/NT1.2;OCM-1移植瘤小鼠尾靜脈注射兩種標(biāo)記抗體后,腫瘤組織未見明顯放射性濃聚.本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為99mTc-EGFR Nanobody五聚體優(yōu)于單體可用于腫瘤放射免疫顯像.

摘要： 本發(fā)明提供了一種抗PD?1的納米抗體、編碼基因、重組納米抗體、重組載體、重組菌株和應(yīng)用，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述抗PD?1納米抗體和重組納米抗體，可以特異性識(shí)別并結(jié)合PD?1抗原，從而阻斷PD?1/PD?L1的結(jié)合，具有體外腫瘤細(xì)胞殺傷作用，殺傷強(qiáng)度與作用時(shí)間和效靶比及藥物濃度有關(guān)，同時(shí)還具有體內(nèi)抗腫瘤作用。

摘要： 本發(fā)明提供了一種抗HER?2的納米抗體、編碼基因、重組納米抗體、重組載體、重組菌株和應(yīng)用，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了抗HER?2的納米抗體，針對(duì)HER?2的重鏈，包括框架區(qū)FR和抗原決定簇互補(bǔ)CDR；同時(shí)將編碼所述抗HER?2的納米抗體基因和人IgG Fc段基因融合表達(dá)的重組納米抗體。在本發(fā)明實(shí)施例中，所述重組納米抗體能夠特異性的識(shí)別并結(jié)合HER?2抗原，親和力為9.34μM；同時(shí)重組納米抗體對(duì)SKBR?3細(xì)胞具有毒性作用，且毒性作用與重組納米抗體的作用時(shí)間以及作用濃度有關(guān)，能夠應(yīng)用于腫瘤的分子診斷和抗腫瘤藥物的制備。

摘要： 本發(fā)明提供了一種抗CTLA?4的納米抗體、編碼基因、重組納米抗體、重組載體、重組菌及其應(yīng)用，屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的抗CTLA?4的納米抗體D11針對(duì)CTLA?4的重鏈設(shè)計(jì)，抗CTLA?4的納米抗體D11包括框架區(qū)FR和抗原決定簇互補(bǔ)CDR。本發(fā)明的納米抗體D11能夠特異性識(shí)別CTLA?4抗原。本發(fā)明將編碼所述抗CTLA?4的納米抗體D11的編碼基因和人IgG Fc段基因融合表達(dá)的重組納米抗體，能夠特異性的識(shí)別CTLA?4抗原，能夠應(yīng)用于腫瘤的分子診斷和/或抗腫瘤藥物的制備。

摘要： 本發(fā)明提供了一種抗LAG?3的納米抗體、編碼基因、重組納米抗體、重組載體、重組菌株和應(yīng)用，屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述納米抗體來源于駱駝，包括框架區(qū)FR和抗原決定簇互補(bǔ)CDR，針對(duì)LAG?3的重鏈。本發(fā)明基于所述抗LAG?3的納米抗體，將其與人IgG Fc段連接，形成重組納米抗體，能夠特異性的識(shí)別LAG?3抗原。在本發(fā)明實(shí)施例中，將所述重組納米抗體與T細(xì)胞和Daudi細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，所述重組納米抗體殺傷腫瘤細(xì)胞的最佳濃度為200μg/mL；同時(shí)所述重組納米抗體可促進(jìn)T/CD19 CAR?T細(xì)胞對(duì)多種腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。

摘要： 本發(fā)明提供了一種基于羽扇豆過敏原Lup an1納米抗體篩選雙抗夾心納米抗體對(duì)的方法，包括如下步驟：(1)膠體金的制備；(2)金標(biāo)納米抗體的制備；(3)采用免疫層析試紙條方法進(jìn)行雙抗夾心抗體對(duì)的篩選。本發(fā)明所述的基于羽扇豆過敏原Lup an1納米抗體的使用膠體金免疫層析試紙條方法篩選雙抗夾心納米抗體對(duì)，能開發(fā)一種操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)較短的雙抗夾心檢測(cè)體系中捕獲抗體與檢測(cè)抗體的篩選方法，用于后續(xù)食物中過敏原檢測(cè)方法的構(gòu)建。

摘要： 本發(fā)明提供了一種抗CTLA?4的納米抗體、編碼基因、重組納米抗體、重組載體、重組菌及其應(yīng)用，屬于免疫學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的抗CTLA?4的納米抗體E5針對(duì)CTLA?4的重鏈設(shè)計(jì)，抗CTLA?4的納米抗體E5包括框架區(qū)FR和抗原決定簇互補(bǔ)CDR。本發(fā)明的納米抗體E5能夠特異性識(shí)別CTLA?4抗原。本發(fā)明將編碼所述抗CTLA?4的納米抗體E5的編碼基因和人IgG Fc段基因融合表達(dá)的重組納米抗體，能夠特異性的識(shí)別CTLA?4抗原，能夠應(yīng)用于腫瘤的分子診斷和/或抗腫瘤藥物的制備。

摘要： 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抗豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白納米抗體、雙價(jià)中和納米抗體及其應(yīng)用。該抗豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白雙價(jià)中和納米抗體由兩個(gè)相同氨基酸序列的單價(jià)納米抗體組成，單價(jià)納米抗體的可變區(qū)具有3個(gè)特定序列的互補(bǔ)決定區(qū)CDR1、CDR2、CDR3。該抗豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白雙價(jià)中和納米抗體既具有優(yōu)異的特異性抗原結(jié)合能力，又具有穩(wěn)定的PCV2病毒中和活性；在豬圓環(huán)病毒相關(guān)疾病防治、尤其是在PCV2感染后作為治療藥物中的應(yīng)用具有廣泛價(jià)值。

摘要： 本發(fā)明提供了抗SARS?CoV?2 S蛋白的納米抗體、重組納米抗體、重組載體、重組菌及應(yīng)用，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明所述納米抗體包括C4和C9，C4和C9均為駝源，可特異性識(shí)別SARS?CoV?2 S蛋白。本發(fā)明將所述C4和C9分別與人IgG Fc段進(jìn)行融合，可獲得重組C4和重組C9兩種重組納米抗體，并且經(jīng)驗(yàn)證，所述重組C4和重組C9均能夠特異性的識(shí)別SARS?CoV?2 S蛋白，都能夠應(yīng)用于新冠病毒的診斷試劑或抗病毒藥物的制備。

摘要： 本發(fā)明公開了SARS?CoV?2中和性納米抗體、自組裝鐵蛋白融合納米抗體及制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明首先提供了氨基酸序列為SEQ ID NO.1所示的SARS?CoV?2中和性納米抗體，將該其與鐵蛋白的C端融合得到自組裝鐵蛋白融合納米抗體，電鏡觀察證實(shí)其展示在自組裝鐵蛋白籠形結(jié)構(gòu)表面。本發(fā)明進(jìn)一步將這些納米抗體進(jìn)行突變優(yōu)化以提高其表達(dá)量和表達(dá)效率并提高其對(duì)假病毒的中和活性。本發(fā)明利用原核表達(dá)系統(tǒng)、真核表達(dá)系統(tǒng)分別表達(dá)納米抗體融合蛋白。本發(fā)明提供的自組裝鐵蛋白融合納米抗體顆粒在細(xì)胞水平上對(duì)SARS?CoV?2假病毒具有較強(qiáng)的中和能力，具有成為一種低成本、高中和活性的新冠病毒診斷和治療藥物的潛力。

摘要： 本申請(qǐng)涉及抗體庫構(gòu)建技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種半合成納米抗體庫構(gòu)建方法和納米抗體庫，所述方法包括：以CDR1、CDR2和CDR3的cDNA為模板，進(jìn)行第一擴(kuò)增，分別得到CDR1、CDR2和CDR3的堿基序列；將FR1、FR2、FR3和FR4的核苷酸序列與所述CDR1、所述CDR2和所述CDR3的堿基序列連接，并進(jìn)行第二擴(kuò)增，得到目的基因片段；將目的基因片段與第一載體連接，得到第二載體；將所述第二載體進(jìn)行培養(yǎng)后篩選，得到含有納米抗體庫的目標(biāo)載體，其中，所述目的基因片段的堿基序列連接關(guān)系包括：FR1?CDR1?FR2?CDR2?FR3?CDR3?FR4。通過FR1、FR2、FR3和FR4的抗體骨架與合成部分CDR區(qū)域，構(gòu)建半合成的納米抗體庫，避免了現(xiàn)有納米抗體需要通過抗原免疫接種獲得，可用抗原直接篩選，快速獲得人源納米抗體，節(jié)省了成本和時(shí)間。