摘要： 目的探討褪黑素(MT)聯(lián)合鋅(Zn)對(duì)H 2O 2誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮(ARPE)細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。方法常規(guī)培養(yǎng)ARPE細(xì)胞株(ARPE-19),利用不同濃度H 2O 2處理ARPE-19細(xì)胞,將細(xì)胞存活率接近50%的H 2O 2濃度作為氧化損傷濃度。將ARPE-19細(xì)胞分為:不同濃度MT(10-5 mol·L^(-1)、10-6 mol·L^(-1)、10-7 mol·L^(-1))+ZnCl 2(15μmol·L^(-1))組,ZnCl 2組(采用15μmol·L^(-1) ZnCl 2培養(yǎng)細(xì)胞),H 2O 2組(不添加MT和ZnCl 2培養(yǎng)細(xì)胞),空白對(duì)照組(細(xì)胞不做任何處理)。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況。采用試劑盒測(cè)量各組細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)的含量。ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)白細(xì)胞介素-6(IL-6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)量。結(jié)果當(dāng)H 2O 2濃度為300μmol·L^(-1)時(shí),細(xì)胞存活率為(54.31±1.91)%,此時(shí)細(xì)胞存活率接近50%,后續(xù)實(shí)驗(yàn)中均選擇該濃度作為氧化損傷濃度。ZnCl 2組、10-5 mol·L^(-1) MT+ZnCl 2組、10-6 mol·L^(-1) MT+ZnCl 2組、10-7 mol·L^(-1) MT+ZnCl 2組細(xì)胞凋亡率分別為3.05%、1.17%、1.50%、1.71%,與空白對(duì)照組(0)相比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)。H 2O 2組、ZnCl 2組、10-7 mol·L^(-1) MT+ZnCl 2組細(xì)胞內(nèi)ROS含量分別為空白對(duì)照組的1.76倍、1.59倍、1.41倍,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。H 2O 2組細(xì)胞內(nèi)MDA的含量較空白對(duì)照組顯著提高(P0.05)。H 2O 2組、ZnCl 2組、10-7 mol·L^(-1) MT+ZnCl 2組細(xì)胞內(nèi)IL-6和TNF-α的表達(dá)量均顯著高于空白對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.05)。結(jié)論MT聯(lián)合Zn能有效降低H 2O 2損傷所致ARPE-19細(xì)胞內(nèi)ROS的含量,隨之減少細(xì)胞內(nèi)MDA的含量,同時(shí)也能抑制IL-6和TNF-α的表達(dá)量,從而起到保護(hù)RPE細(xì)胞的作用。

摘要： 目的 探討不同濃度2型轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β2)對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)生物學(xué)特性及纖維化指標(biāo)結(jié)締組織生長因子(CTGF)的調(diào)控。方法 RPE細(xì)胞分別用0,1,5,10,15 ng/ml TGF-β2處理,并用CCK-8檢測(cè)細(xì)胞增殖活性確定合適的TGF-β2濃度范圍。根據(jù)CCK-8結(jié)果確定后續(xù)實(shí)驗(yàn)分為0,1,5,10 ng/ml TGF-β2組,倒置顯微鏡觀察RPE細(xì)胞的形態(tài)變化,細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力,Western blot檢測(cè)纖連蛋白(Fibronectin)、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMΑ)、鈣黏附蛋白E(E-cadherin)、閉鎖小帶蛋白(ZO-1)、CTGF的表達(dá),PCR檢測(cè)Fibronectin、α-SMA在mRNA水平的變化。結(jié)果 CCK-8結(jié)果顯示,隨著TGF-β2濃度的增加,細(xì)胞增殖顯著增加(P0.05),而Fibronectin的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PCR結(jié)果顯示隨著TGF-β2濃度增加Fibronectin、α-SMA的mRNA表達(dá)均提高,其中5 ng/ml、10 ng/ml TGF-β2組與0 ng/ml組間,5 ng/ml和10 ng/ml組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。纖維化指標(biāo)CTGF蛋白的表達(dá)隨著TGF-β2濃度增加逐漸升高,且兩兩之間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。結(jié)論 TGF-β2可以誘導(dǎo)RPE細(xì)胞發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過程,通過CTGF調(diào)節(jié)組織的纖維化過程。

摘要： 目的:探討脫氧膽酸基接枝的殼聚糖衍生物負(fù)載姜黃素納米粒的合成方法及該藥物納米粒對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮(hRPE)細(xì)胞的作用。方法:合成姜黃素/殼聚糖-脫氧膽酸納米粒并分析其性能。將負(fù)載熒光染料異硫氰酸熒光素的殼聚糖-脫氧膽酸及姜黃素/殼聚糖-脫氧膽酸作用于hRPE細(xì)胞24h后,于倒置熒光顯微鏡下觀察避光培養(yǎng)1、3、5d后二者與hRPE細(xì)胞的相互關(guān)系。結(jié)果:通過將姜黃素與殼聚糖-脫氧膽酸混合制成負(fù)載藥的殼聚糖衍生物納米粒為淡黃色;藥物從納米粒中的釋放在96h后達(dá)到平衡,累積釋放藥物量為31.6%。異硫氰酸/殼聚糖-脫氧膽酸與hRPE細(xì)胞作用1d后,殼聚糖-脫氧膽酸納米粒大部分仍位于近細(xì)胞膜的部位;作用3d后,納米粒逐漸向細(xì)胞核會(huì)聚,且大部分位于細(xì)胞核周圍;作用5d后,可看到殼聚糖-脫氧膽酸納米粒已進(jìn)入細(xì)胞核,且納米?？赡茉诩?xì)胞內(nèi)溶酶體的作用下有部分降解。姜黃素/殼聚糖-脫氧膽酸納米粒和hRPE細(xì)胞作用的關(guān)系與殼聚糖-脫氧膽酸大致相同。結(jié)論:通過殼聚糖-脫氧膽酸包載的姜黃素納米粒能持續(xù)釋放出姜黃素,具有較持久的緩釋功能。

摘要： 目的:探討缺氧條件下辛伐他汀(Sim)對(duì)體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮(RPE-19)細(xì)胞的影響及其可能機(jī)制。方法:將體外培養(yǎng)的人RPE-19細(xì)胞隨機(jī)分為三組:對(duì)照組、缺氧組(培養(yǎng)基中CoCl_(2)的最終濃度為125μmol/L)和Sim處理組(在含有125μmol/L CoCl_(2)的RPE-19細(xì)胞培養(yǎng)基中加入3μmol/L Sim)。24h后,觀察RPE-19細(xì)胞的形態(tài),用MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和免疫印跡法檢測(cè)缺氧誘導(dǎo)因子1-α(HIF-1α)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的分泌水平和蛋白表達(dá),采用免疫印跡法檢測(cè)自噬蛋白的表達(dá)水平,TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果:缺氧條件下RPE-19細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生了明顯變化。缺氧組RPE-19細(xì)胞中HIF-1α和VEGF的蛋白表達(dá)明顯增加,Sim治療后顯著降低。Beclin1和LC3B蛋白在CoCl_(2)+Sim組中的表達(dá)水平有所下降,且表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組和CoCl_(2)組。缺氧條件下,Sim抑制了RPE-19細(xì)胞增殖,促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡。結(jié)論:Sim可抑制缺氧條件下RPE-19細(xì)胞HIF-1α和VEGF蛋白的表達(dá),抑制細(xì)胞增殖,促進(jìn)凋亡,Sim促進(jìn)RPE-19細(xì)胞凋亡的機(jī)制可能與其抑制自噬有關(guān)。

摘要： 目的探討視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞通過分泌含有miR-4488的外泌體抑制糖尿病視網(wǎng)膜病變進(jìn)展的分子機(jī)制。方法將人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞系A(chǔ)RPE-19細(xì)胞分為空白組、高糖組。將人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HRMECs)分為NG組、HG組、NG+外泌體組和HG+外泌體組。空白組、NG組和NG+外泌體組細(xì)胞用含5.5 mmol·L^(-1)正常濃度葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h;高糖組、HG組和HG+外泌體組細(xì)胞用含30 mmol·L^(-1)高濃度葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h;NG+外泌體組和HG+外泌體組細(xì)胞在培養(yǎng)基中分別加入空白組或高糖組ARPE-19細(xì)胞分泌的外泌體40μg·L^(-1)。PKH67綠色熒光標(biāo)記外泌體;利用CCK-8法、Transwell小室法檢測(cè)HRMECs增殖、遷移和血管生成。取空白組和高糖組ARPE-19細(xì)胞外泌體進(jìn)行miRNA微陣列分析。采用雙熒光素酶報(bào)告分析檢測(cè)miR-4488和轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ(TGFβR2)基因序列的靶向關(guān)系。采用Western blot或免疫熒光染色檢測(cè)各組HRMECs中TGFβR2、Smad2、p-Smad2ser467或Desmin、α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)。結(jié)果空白組和高糖組ARPE-19細(xì)胞分泌的被PKH67標(biāo)記的外泌體加入培養(yǎng)基后都可被HRMECs吸收。與NG組相比,HG組HRMECs細(xì)胞增殖率、遷移率、血管結(jié)點(diǎn)數(shù)和血管總長度、TGFβR2和p-Smad2ser467蛋白表達(dá)量、Desmin和α-SMA蛋白熒光強(qiáng)度均增加(均為P0.05)。與空白組相比,高糖組ARPE-19細(xì)胞分泌的外泌體中miR-4488相對(duì)表達(dá)量增加,且miR-4488模擬物和TGFβR2wt共轉(zhuǎn)染可增加雙熒光素酶活性(均為P<0.05)。結(jié)論在高糖條件下,ARPE-19細(xì)胞釋放的外泌體可通過miR-4488/TGFβR2/Smad信號(hào)通路抑制HRMECs間充質(zhì)轉(zhuǎn)化。

摘要： 目的探討高糖誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(ARPE-19)中含有卵巢腫瘤結(jié)構(gòu)域的6B反義RNA 1(OTUD6B-AS1)的功能及其作用機(jī)制。方法取ARPE-19細(xì)胞,加入含30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培養(yǎng)基培養(yǎng),設(shè)為高糖組,另取ARPE-19細(xì)胞不做任何處理設(shè)為對(duì)照組。用Lipofectamine^(TM) 2000轉(zhuǎn)染試劑分別將過表達(dá)空質(zhì)粒(pcDNA-NC組)、OTUD6B-AS1過表達(dá)質(zhì)粒(pcDNA-OTUD6B-AS1組)和OTUD6B-AS1過表達(dá)質(zhì)粒+miR-21-5p模擬物(pcDNA-OTUD6B-AS1+miR-21-5p mimics組)轉(zhuǎn)染進(jìn)高糖誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測(cè)細(xì)胞中OTUD6B-AS1和miR-21-5p的表達(dá);用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖能力;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組細(xì)胞遷移能力;熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證OTUD6B-AS1與miR-21-5p的靶向關(guān)系。結(jié)果與對(duì)照組比較,高糖組ARPE-19細(xì)胞中OTUD6B-AS1表達(dá)量顯著降低、miR-21-5p表達(dá)量顯著升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。與對(duì)照組比較,高糖組細(xì)胞凋亡率顯著升高,細(xì)胞增殖率和遷移率均顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。與pcDNA-NC組比較,pcDNA-OTUD6B-AS1組中細(xì)胞增殖率和遷移率顯著升高,細(xì)胞凋亡率顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)顯示,OTUD6B-AS1可靶向miR-21-5p。與pcDNA-OTUD6B-AS1組比較,pcDNA-OTUD6B-AS1+miR-21-5p mimics組細(xì)胞凋亡率顯著升高,細(xì)胞增殖率和遷移率顯著降低,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P<0.05)。結(jié)論OTUD6B-AS1可抑制高糖誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞凋亡,并促進(jìn)細(xì)胞增殖和遷移,其作用機(jī)制與miR-21-5p有關(guān)。

摘要： 增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變(PVR)是一種發(fā)生在孔源性視網(wǎng)膜脫離(RRD)自然病程中或復(fù)位手術(shù)后的嚴(yán)重并發(fā)癥,常常導(dǎo)致患者視力喪失。目前,臨床缺乏有效的治療方法。PVR病理特征是多種細(xì)胞在細(xì)胞因子的作用下發(fā)生的過度炎癥反應(yīng)和異常增生,最終在視網(wǎng)膜表面形成增殖膜及進(jìn)一步的牽拉性視網(wǎng)膜脫離(TRD)。對(duì)PVR發(fā)病機(jī)制的深入研究將有助于為其治療尋找有前景的分子靶標(biāo)。近年研究發(fā)現(xiàn),血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在PVR發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。本文就VEGF及RPE細(xì)胞EMT在PVR發(fā)病中的作用,以及二者的相互聯(lián)動(dòng)機(jī)制進(jìn)行了總結(jié),以期為PVR的治療和臨床研究提供新的思路。

摘要： 目的分析薯蕷皂苷元對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(ARPE-19)增殖、凋亡和細(xì)胞內(nèi)超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、丙二醛含量的影響。方法將ARPE-19分為正常培養(yǎng)組、碘酸鈉預(yù)處理組和薯蕷皂苷元10、20、40、80μg/ml劑量組。檢測(cè)各組細(xì)胞增殖、凋亡濃度變化和細(xì)胞中超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶、丙二醛含量的變化。結(jié)果碘酸鈉預(yù)處理組增殖濃度低于正常培養(yǎng)組及薯蕷皂苷元20、40和80μg/ml劑量組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論薯蕷皂苷元通過增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活力,降低丙二醛含量,促進(jìn)ARPE-19細(xì)胞增殖,阻止ARPE-19細(xì)胞凋亡,抑制碘酸鈉對(duì)ARPE-19細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng),且與劑量具有相關(guān)性。

摘要： 目的基于miR-34a/沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)軸探討柚皮素對(duì)H_(2)O_(2)誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(RPE)氧化損傷的保護(hù)作用。方法MTT法檢測(cè)不同濃度的柚皮素對(duì)H_(2)O_(2)誘導(dǎo)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE-19存活率的影響以選取適宜柚皮素濃度為后續(xù)實(shí)驗(yàn)濃度。取對(duì)數(shù)期生長的ARPE-19細(xì)胞分為對(duì)照組、H_(2)O_(2)組(200μmol/L)、20μg/mL柚皮素組、20μg/mL柚皮素+mimics NC組、20μg/mL柚皮素+miR-34a mimics組。采用RT-qPCR檢測(cè)細(xì)胞中miR-34a和SIRT1 mRNA的表達(dá),MTT法及Annexin V-FITC/PI雙染分別檢測(cè)細(xì)胞存活與凋亡情況,熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS水平,生化法檢測(cè)SOD活性、MDA和GSH水平,并采用JC-1法檢測(cè)線粒體膜電位(MMP),Western blot檢測(cè)SIRT1及Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達(dá)。結(jié)果與對(duì)照組相比,H_(2)O_(2)組ARPE-19細(xì)胞中miR-34a表達(dá)、ARPE-19細(xì)胞凋亡率、ROS、MDA含量、Bax和Caspase-3表達(dá)顯著升高(P<0.05),SIRT1 mRNA表達(dá)、ARPE-19細(xì)胞存活率、SOD、GSH含量、MMP水平、SIRT1和Bcl-2表達(dá)顯著降低(P<0.05);與H_(2)O_(2)相比,柚皮素可改善H_(2)O_(2)誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞損傷,下調(diào)miR-34a表達(dá),降低ROS、MDA、Bax和Caspase-3含量(P<0.05),上調(diào)SIRT1、MMP、Bcl-2表達(dá),增加GSH、SOD活性(P<0.05);上調(diào)ARPE-19細(xì)胞miR-34a的表達(dá),可逆轉(zhuǎn)柚皮素對(duì)H_(2)O_(2)誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用。結(jié)論柚皮素可能通過下調(diào)miR-34a,促進(jìn)SIRT1的表達(dá),抑制RPE細(xì)胞凋亡,保護(hù)H_(2)O_(2)誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞氧化損傷。

摘要： 目的探討薯蕷皂苷(Dio)對(duì)高糖(HG)誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜色素上皮(RPE)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,并分析其機(jī)制。方法用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑8(CCK-8)法篩選葡萄糖濃度和無細(xì)胞毒性的Dio劑量范圍。將ARPE-19細(xì)胞分為對(duì)照組(5 mmol·L^(-1)葡萄糖處理48 h)、模型組(50 mmol·L^(-1)葡萄糖處理48 h)和低、中、高劑量Dio處理組(分別用50 mmol·L^(-1)葡萄糖聯(lián)合0.5 mmol·L^(-1)、2.0 mmol·L^(-1)和8.0 mmol·L^(-1) Dio處理48 h)。CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞活性;FITC標(biāo)記膜聯(lián)蛋白-V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)染色檢測(cè)細(xì)胞凋亡;熒光探針法檢測(cè)活性氧(ROS)水平;試劑盒法檢測(cè)丙二醛(MDA)水平、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性;JC-1染色檢測(cè)線粒體膜電位;Western blot法檢測(cè)B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)、cleaved Caspase-3和Yes相關(guān)蛋白(YAP)的表達(dá)水平;免疫熒光法觀察YAP的表達(dá)。結(jié)果篩選的葡萄糖濃度為50 mmol·L^(-1),Dio的無細(xì)胞毒性的劑量為0.5 mmol·L^(-1)、2.0 mmol·L^(-1)、8.0 mmol·L^(-1)。與對(duì)照組比較,模型組細(xì)胞活性、線粒體膜電位、CAT和GSH-Px活性以及Bcl-2蛋白和YAP蛋白表達(dá)水平均明顯降低(均為P<0.001),細(xì)胞凋亡水平、ROS和MDA水平以及cleaved Caspase-3蛋白和Bax蛋白表達(dá)水平均明顯升高(均為P<0.001);與模型組比較,低、中、高劑量Dio處理組細(xì)胞活性、線粒體膜電位、CAT和GSH-Px活性以及Bcl-2蛋白和YAP蛋白表達(dá)水平均明顯升高(均為P<0.05),細(xì)胞凋亡水平、ROS和MDA水平以及cleaved Caspase-3蛋白和Bax蛋白表達(dá)水平均明顯降低,且均呈劑量依賴性(均為P<0.05)。結(jié)論Dio可通過激活YAP信號(hào),降低氧化應(yīng)激反應(yīng)和抑制線粒體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑,進(jìn)而減輕HG誘導(dǎo)的RPE細(xì)胞損傷。

摘要： 目的：探討二甲基亞砜(Dimethyl Sulfoxide,DMSO)對(duì)體外培養(yǎng)兔視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epithelium,RPE)增殖及遷移的影響. 方法：用含有不同濃度DMSO細(xì)胞培養(yǎng)基,培養(yǎng)兔RPE細(xì)胞24、48、72小時(shí),采用透射電鏡(Transmission ElectronMicorscope,TEM)觀察細(xì)胞形態(tài)變化;MTT比色法檢測(cè)多個(gè)濃度DMSO(0.2％、0.5％、1.0％、1.5％、2.0％、2.5％、3.0％、3.5％、4.0％)對(duì)兔RPE細(xì)胞OD值的影響并計(jì)算其存活率,選取其中三個(gè)濃度組進(jìn)一步檢測(cè);流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)DMSO(1.0％、2.0％、4.0％)對(duì)兔RPE細(xì)胞凋亡率的影響;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)DMSO(2％)對(duì)兔RPE細(xì)胞遷移能力的影響. 結(jié)果：MTT檢測(cè)：同時(shí)相內(nèi)除0.2％DMSO干預(yù)組外,各濃度DMSO組細(xì)胞存活率明顯低于正常對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);FCM檢測(cè)：干預(yù)24h時(shí),高劑量組(4％DMSO)與正常對(duì)照組相比,細(xì)胞凋亡率明顯增高(P＜0.01);干預(yù)48h、72h時(shí),中、高劑量組(4％DMSO)與正常對(duì)照組相比,細(xì)胞凋亡率明顯增高(P＜0.05或P＜0.01).劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：劃痕后正常組兔RPE細(xì)胞的遷移能力明顯強(qiáng)于DMSO干預(yù)組兔RPE細(xì)胞的遷移能力,DMSO干預(yù)組劃痕內(nèi)僅有少量細(xì)胞,正常組劃痕內(nèi)細(xì)胞已基本長滿. 結(jié)論：DMSO干預(yù)兔RPE細(xì)胞后,隨時(shí)間的增長可明顯抑制其增殖及遷移,且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡呈劑量依賴性.

摘要： 山萘酚屬于一種天然多酚類物質(zhì),存在于多種食物(例如藍(lán)莓類和豆類等食物)以及某些中藥(例如覆盆子、菊花、銀杏葉和黃芪等中藥)中,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：山萘酚具有較強(qiáng)的抗氧化活性和多種生物學(xué)功能,包括抗炎和抗癌等生物活性.通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究了山蔡酚對(duì)眼部不同組織細(xì)胞(包括角膜上皮、晶狀體上皮、視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、Muller細(xì)胞及視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞)的氧化損傷保護(hù)作用及其相關(guān)分子作用機(jī)制。

摘要： 本文研究460-480nm藍(lán)光光照視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞后,聚ADP核糖聚1對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用,探討光致視網(wǎng)膜細(xì)胞氧化損傷保護(hù)的新途徑.

摘要： 本文通過碘酸鈉腹腔注射建立C57BL/6小鼠氧化應(yīng)激模型,觀察補(bǔ)腎養(yǎng)血明目方對(duì)碘酸鈉誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化應(yīng)激的保護(hù)作用.

摘要： 目的：觀察黃芪多糖(APS)對(duì)過氧化氫損傷的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用.rn 方法：培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞系(human retinal pigment epithelium,ARPE-19)分為正常對(duì)照組、過氧化氫損傷組和不同濃度(1000 mg·L-1、500 mg· L-1) APS干預(yù)組,正常對(duì)照組不做處理,過氧化氫損傷組加入200μmol·L1的過氧化氫,APS干預(yù)組加入不同濃度(1000 mg·L-1、500 mg·L-1)APS后加入200μmol·L-1的過氧化氫.用倒置熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化;MTT檢測(cè)細(xì)胞活性;DAPI染色觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化;實(shí)時(shí)細(xì)胞電子分析系統(tǒng)(real-time cell electronic sensing system,RT-CES)實(shí)時(shí)記錄細(xì)胞生長狀態(tài);應(yīng)用caspase-3活性檢測(cè)試劑盒測(cè)定各組細(xì)胞中caspase-3 的活性.rn 結(jié)果：過氧化氫損傷組細(xì)胞皺縮，懸浮細(xì)胞增多，APS干預(yù)后細(xì)胞狀態(tài)改善。MTT顯示1000 mg·L-1,500 mg·L-1濃度的APS孵育24h后細(xì)胞存活率分別為(99.86±3.64)%和(101.03±3.52)%，與正常對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，過氧化氫損傷組細(xì)胞存活率為(56.49±2.30)%，比正常對(duì)照組顯著降低，不同濃度黃芪多糖干預(yù)后，細(xì)胞存活率升高到(88.14±2.97)%和(80.75±3.13)%,與過氧化氫損傷組相比差異具有顯著地統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.O1)。DAPI染色顯示正常細(xì)胞核均勻淡染，過氧化氫損傷組出現(xiàn)強(qiáng)熒光點(diǎn)和致密的細(xì)胞核，APS處理后凋亡程度減輕。RT-CES顯示APS處理可以減少過氧化氫造成的細(xì)胞損傷。Caspase-3檢測(cè)發(fā)現(xiàn)過氧化氫造成細(xì)胞caspase-3水平升高，APS處理后caspase-3水平下降。rn 結(jié)論：APS可以抑制過氧化氧誘導(dǎo)的ARPE-19的凋亡，這為APS的臨床應(yīng)用提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

摘要： 研究體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的生長特性及可見光對(duì)其影響.用倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察人視網(wǎng)膜色素上皮(hRPE)細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),用計(jì)數(shù)法和噻唑藍(lán)(MTT)法繪制生長曲線.從光照時(shí)間、光照時(shí)有無血清、光照后是否換液、光照后培養(yǎng)時(shí)間這4方面考查可見光對(duì)hRPE細(xì)胞的損傷情況.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,體外培養(yǎng)的hRPE細(xì)胞為多角形,有極性,細(xì)胞器正常,生長旺盛.(8423±359)Ix的可見光光照2h就能對(duì)hRPE細(xì)胞造成顯著損傷.光照時(shí)間為5h,光照時(shí)培養(yǎng)液中含10％胎牟血清,光照后不換培養(yǎng)液,光照后培養(yǎng)時(shí)間為24h,此條件下hRPE損傷率為58％.體外培養(yǎng)的hRPE細(xì)胞具有正常的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生長規(guī)律.可見光可對(duì)hRPE細(xì)胞造成損傷,并且損傷程度有時(shí)間積累效應(yīng).因此,在日常生活中應(yīng)盡可能避免陽光直射,減少光照時(shí)間,以降低視網(wǎng)膜光損傷發(fā)生率,保護(hù)眼睛.

摘要： 目的:研究體外培養(yǎng)的人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的生長特性及可見光對(duì)其影響.方法:用倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察hRPE細(xì)胞形態(tài)和超微結(jié)構(gòu),用計(jì)數(shù)法和MTT法繪制生長曲線.從光照時(shí)間,光照時(shí)有無血清、光照后是否換液、光照后培養(yǎng)時(shí)這四方面考察可見光對(duì)hRPE細(xì)胞的損傷情況.結(jié)果:體外培養(yǎng)的hRPE細(xì)胞為多角形,有極性,細(xì)胞器正常,生長旺盛.(8423±359)/x的可見光光照2小時(shí)就能對(duì)hRPE細(xì)胞造成顯著損傷.光照時(shí)間為5h,光照時(shí)培養(yǎng)液中含10％胎牛血清,光照后不換培養(yǎng)液,光照后培養(yǎng)時(shí)間為24h,此條件下hRPE損傷率為58％.結(jié)論:體外培養(yǎng)的hRPE細(xì)胞具有正常的形態(tài)結(jié)構(gòu)和生長規(guī)律.可見光可對(duì)hRPE細(xì)胞造成損傷,并且損傷程度有時(shí)間積累效應(yīng).因此,在日常生活中應(yīng)盡可能避免陽光直射,減少光照時(shí)間等,以降低視網(wǎng)膜光損傷發(fā)生率保護(hù)眼睛.

摘要： 本研究將具有優(yōu)異理化性能與超大比表面積的二維納米材料石墨烯引入到bFGF體系。此外，將采用本課題組前期發(fā)明的邊緣功能化球磨法，一步法制備具有高水相分散性與良好生物相容性的羥基功能化石墨烯(GOH)，有效簡(jiǎn)化合成工藝，提高石墨烯在納米載藥體系中的應(yīng)用可行性。

摘要： 眼底自發(fā)熒光是近年來發(fā)展的一項(xiàng)非侵入性眼底成像技術(shù)，它能夠顯示視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的分布情況以及夠反映其功能，可以作為色素上皮細(xì)胞代謝活力的一個(gè)指標(biāo)。頻域OCT能在立體層面上對(duì)視網(wǎng)膜各層情況進(jìn)行清楚的掃描。聯(lián)合這兩項(xiàng)檢查技術(shù)有助于確定某些視網(wǎng)膜疾病發(fā)病機(jī)制、診斷及其預(yù)后評(píng)價(jià)。本文就自發(fā)熒光聯(lián)合頻域OCT在眼底病中的一些圖像進(jìn)行解讀分析。

摘要： 目的：活血散結(jié)方含藥血漿對(duì)PDGF干預(yù)RPE細(xì)胞IGF1蛋白表達(dá)的影響.方法：采用含藥血漿與PDGF對(duì)體外培養(yǎng)的RPE細(xì)胞進(jìn)行分組干預(yù),并采用western blot方法檢測(cè)RPE細(xì)胞中IGF1表達(dá)的情況.結(jié)果：PDGF干預(yù)可以促進(jìn)RPE細(xì)胞中IGF1蛋白的高表達(dá),與正常血漿組比較有極顯著性差異(P＜0.01);活血散結(jié)含藥血漿具有類似AG1296的抑制IGF1蛋白高表達(dá)的作用,PDGF+含藥血漿組與PDGF組比較有極顯著性差異(P＜0.01).結(jié)論：活血散結(jié)方能抑制PVR的形成,其作用機(jī)制可能是通過抑制PDGF的活性,進(jìn)而抑制RPE細(xì)胞增殖并抑制其釋放IGF1來實(shí)現(xiàn)的.

摘要： 本發(fā)明涉及一種用于在體外獲得人類視網(wǎng)膜祖細(xì)胞的方法，該方法包括以下步驟：(i)將人類多能干細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)物放置于促神經(jīng)培養(yǎng)基中；以及，(ii)使所述培養(yǎng)物保持在所述促神經(jīng)培養(yǎng)基中，直至出現(xiàn)色素細(xì)胞和/或神經(jīng)上皮樣結(jié)構(gòu)。有利地，可進(jìn)行額外的步驟，以獲得RPE細(xì)胞和/或神經(jīng)視網(wǎng)膜前體。

摘要： 本發(fā)明涉及一種用于獲得人視網(wǎng)膜祖細(xì)胞的體外方法，包括以下步驟：(i)將人多能干細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)物置于干細(xì)胞特異性促神經(jīng)培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)物不含飼養(yǎng)細(xì)胞；和(ii)在所述干細(xì)胞特異性促神經(jīng)培養(yǎng)基中維持所述培養(yǎng)物，直至出現(xiàn)色素細(xì)胞和/或神經(jīng)上皮樣結(jié)構(gòu)。有利地，可以進(jìn)行另外的步驟以獲得RPE細(xì)胞和/或神經(jīng)視網(wǎng)膜的前體。

摘要： 本發(fā)明涉及一種用于在體外獲得人類視網(wǎng)膜祖細(xì)胞的方法，該方法包括以下步驟：(i)將人類多能干細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)物放置于促神經(jīng)培養(yǎng)基中；以及，(ii)使所述培養(yǎng)物保持在所述促神經(jīng)培養(yǎng)基中，直至出現(xiàn)色素細(xì)胞和/或神經(jīng)上皮樣結(jié)構(gòu)。有利地，可進(jìn)行額外的步驟，以獲得RPE細(xì)胞和/或神經(jīng)視網(wǎng)膜前體。

摘要： 本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分化的方法及其在治療視網(wǎng)膜退行性疾病中的應(yīng)用，該方法為向人羊膜上皮細(xì)胞中添加含有10?100mM煙酰胺和1?10μM曲古抑菌素A的誘導(dǎo)組合物，誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞高表達(dá)MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的典型基因。將利用該方法誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞注射到RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔，通過ERG以及眼底檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大鼠眼睛電生理信號(hào)明顯增強(qiáng)，眼底結(jié)構(gòu)明顯改善，眼球切片HE染色顯示其視網(wǎng)膜厚度明顯增加，經(jīng)過上述方案誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞經(jīng)注射后對(duì)大鼠的視力有一定程度的恢復(fù)。本發(fā)明中的誘導(dǎo)復(fù)合物能夠用于人羊膜上皮細(xì)胞向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的分化以及治療視網(wǎng)膜損傷相關(guān)的眼部疾病。

摘要： 本發(fā)明的復(fù)合體為包含神經(jīng)視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片和水凝膠的復(fù)合體，神經(jīng)視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片分別來源于人多能干細(xì)胞，神經(jīng)視網(wǎng)膜中形成有至少包含視細(xì)胞層的神經(jīng)視網(wǎng)膜層，視細(xì)胞層至少包含選自由視細(xì)胞、視細(xì)胞前體細(xì)胞及視網(wǎng)膜前體細(xì)胞組成的組中的1種以上的細(xì)胞，水凝膠的熔點(diǎn)為20°C～40°C，神經(jīng)視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片的整體包埋于水凝膠中，神經(jīng)視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片各自的表面的切線方向大致平行，神經(jīng)視網(wǎng)膜的頂端面與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片的頂端面相對(duì)，二者被水凝膠隔離而不接觸。

摘要： 本發(fā)明涉及一種視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換模型及其應(yīng)用。將ARPE?19細(xì)胞用胰酶消化后，再轉(zhuǎn)入無血清含N2和非必需氨基酸的DMEM?F12培養(yǎng)基中，并在陪替氏培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，即得視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換模型；該模型用于研究視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞發(fā)生上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換的分子機(jī)制及尋找上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換的干預(yù)靶向。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好。

摘要： 本發(fā)明涉及一種誘導(dǎo)人羊膜上皮細(xì)胞向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞分化的方法及其在治療視網(wǎng)膜退行性疾病中的應(yīng)用，該方法為向人羊膜上皮細(xì)胞中添加含有10?100mM煙酰胺和1?10μM曲古抑菌素A的誘導(dǎo)組合物，誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞高表達(dá)MITF、PMEL17、RPE65、Bestrophin等視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的典型基因。將利用該方法誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞注射到RCS大鼠視網(wǎng)膜下腔，通過ERG以及眼底檢測(cè)發(fā)現(xiàn)大鼠眼睛電生理信號(hào)明顯增強(qiáng)，眼底結(jié)構(gòu)明顯改善，眼球切片HE染色顯示其視網(wǎng)膜厚度明顯增加，經(jīng)過上述方案誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞經(jīng)注射后對(duì)大鼠的視力有一定程度的恢復(fù)。本發(fā)明中的誘導(dǎo)復(fù)合物能夠用于人羊膜上皮細(xì)胞向視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的分化以及治療視網(wǎng)膜損傷相關(guān)的眼部疾病。

摘要： 本發(fā)明公開了視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞在制備治療視網(wǎng)膜退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。胎兒來源的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞在制備治療視網(wǎng)膜退行性疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的視網(wǎng)膜退行性疾病優(yōu)選老年性黃斑變性。本發(fā)明將胎兒來源的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞共同移植治療視網(wǎng)膜退行性疾病模型小鼠，比單純的fRPE和單純的MSC移植治療，對(duì)視網(wǎng)膜損傷后修復(fù)功能效果更好。并且，共同移植比單純一種細(xì)胞的移植，移植后存活的細(xì)胞數(shù)更多，光感受器細(xì)胞解救效果更強(qiáng)。并且，共同移植顯著抑制了退行性疾病模型小鼠的炎癥反應(yīng)，并促進(jìn)內(nèi)源性生長因子的分泌。

摘要： 本發(fā)明的復(fù)合體為包含神經(jīng)視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片和水凝膠的復(fù)合體，神經(jīng)視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片分別來源于人多能干細(xì)胞，神經(jīng)視網(wǎng)膜中形成有至少包含視細(xì)胞層的神經(jīng)視網(wǎng)膜層，視細(xì)胞層至少包含選自由視細(xì)胞、視細(xì)胞前體細(xì)胞及視網(wǎng)膜前體細(xì)胞組成的組中的1種以上的細(xì)胞，水凝膠的熔點(diǎn)為20°C～40°C，神經(jīng)視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片的整體包埋于水凝膠中，神經(jīng)視網(wǎng)膜和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片各自的表面的切線方向大致平行，神經(jīng)視網(wǎng)膜的頂端面與視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞片的頂端面相對(duì)，二者被水凝膠隔離而不接觸。

摘要： 本發(fā)明涉及一種視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換模型及其應(yīng)用。將ARPE-19細(xì)胞用胰酶消化后，再轉(zhuǎn)入無血清含N2和非必需氨基酸的DMEM-F12培養(yǎng)基中，并在陪替氏培養(yǎng)皿中培養(yǎng)，即得視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換模型；該模型用于研究視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞發(fā)生上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換的分子機(jī)制及尋找上皮－間充質(zhì)轉(zhuǎn)換的干預(yù)靶向。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法簡(jiǎn)單易行、重復(fù)性好。